《表1 引物序列及相关信息》

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《大刺鳅生长激素基因克隆与表达分析》

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依据GenBank已公布的黄鳝、斜带石斑鱼等物种GH基因序列设计引物P1和P2（表1），用于扩增大刺鳅GH基因的部分片段；cDNA 5'端和3'端非编码区的扩增采用SMARTer?RACE 5'/3'Kit(634860）试剂盒，按照说明进行操作，扩增特异性引物分别为GH-GSP1和GH-GSP2（表1）。PCR产物经纯化后克隆至p MD19-T载体上，再转化DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序。应用BLAST对获得的大刺鳅GH基因cDNA序列进行同源性比对分析，并推导其开放阅读框（ORF）和编码氨基酸序列；以ClustalX 2.1进行氨基酸序列比对分析，选择比对模型Multiple Alignment Mode（多序列比对），默认参数设置，比对方法选用Do Complete Alignment（进行完全比对）；得出的比对分析结果运用BOXSHADE Server(https：//embnet.vital-it.ch/software/BOX＿form.html）进行着色处理；采用Multiple Sequence Alignment by CLUSTALW(https：//www.genome.jp/toolsbin/clustalw）进行物种同源性分析；利用MEGA 7.0计算进化距离矩阵，以邻接法（Neighbor-joining，NJ）构建系统发育进化树，Bootstrap设为1000。