《表1 高通量技术挖掘虾蟹miRNA的结果》

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《水产虾蟹microRNA组学研究进展》

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miRNA在多种生命活动中发挥着重要作用，也是多种生物机制中不可或缺的一员，随着对miRNA研究的深入，出现了越来越多的miRNA检测方法。检测miRNA的传统方法为miRNA克隆、印迹杂交技术（northern blotting）、微列阵芯片和定量-逆转录PCR法（qRT-PCR)[8]。miRNA克隆是借助PAGE分离出长度约22 nt的RNA，将其连接到5’适配子和3’适配子上，再经过反转录和PCR，对PCR产物进行克隆，最后进行比对和验证[9]；印迹杂交技术广泛应用于miRNA表达量的检测，首先通过变性凝胶对miRNA进行分离，然后将靶miRNA转移并固定到尼龙膜或硝酸纤维薄膜，和被标记的DNA探针进行杂交，最后利用显影来进行检测[10]；微列阵芯片是将多个能够与目标miRNA进行序列互补的探针固定在芯片上，与被标记的miRNA进行杂交，最后经过信号检测，得到miRNA的分析表达谱[9]；qRT-PCR是首先将miRNA进行反转录得到cDNA，以cDNA为模板进行PCR，在PCR反应中加入荧光基因，通过检测荧光信号的积累量来完成miRNA的定量分析[11]。传统的检测方法虽然应用广泛，但其普遍存在灵敏度低，特异性差等问题，为解决这些问题，也兴起了一些新检测方法，如高通量测序技术[12]、等温指数扩增法[13](exponential amplification reaction，EXPAR）、环介导等温扩增[14](loop-mediated isothermal amplification，LAMP）、滚环扩增[15](rolling circle amplification，RCA）、链置换扩增反应[16](strand displacement amplification，SDA）、解旋酶依赖性扩增法[17](helicase-dependent amplification，HDA）等，其中，高通量测序技术具有高质量、高通量、低成本的优点，其不仅能识别miRNA，而且还可为我们提供有关其表达水平信息的有效方法，极大地推动了虾蟹miRNA的研究进展（表1）。后期，在对miRNA靶基因进行功能验证时，我们通常会采用RNA干扰技术、基因敲除等方法来验证靶基因的功能。