《表1 扩增分子伴侣所用引物》

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《共表达分子伴侣提高漆酶在毕赤酵母中的分泌》

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结合参考文献，作者分别选取蛋白折叠（BIP、ERO1）、囊泡运输（SEC53、SEC1）、胁迫应激反应（HAC1、GCN4）模块中的6个基因，设计引物扩增P.pastoris GS115分子伴侣基因，见表1。取0.5μL的GS115基因组DNA为扩增模板，分别加入表1中的6组分子伴侣基因扩增引物，用Primer Star HS高保真酶扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测确认大小正确后，胶回收，用Pml I和Xho I酶切；质粒pGAPZB同样用Pml I和Xho I酶切，柱回收；连接，构建成功6个分子伴侣的组成型表达质粒，并将对分泌表达量有提高的分子伴侣进行组合共表达，构建一系列质粒及菌株，见表2。