《表1 引物序列：枯草芽胞表面CotC和CotG共展示海藻糖合酶研究》

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《枯草芽胞表面CotC和CotG共展示海藻糖合酶研究》

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检索GenBank中已登录的cot C和cot G基因序列，通过软件CE Design V1.04设计多片段无缝克隆特异性引物，以本实验室构建质粒p ET-15b-tre S为模板扩增获得tre S基因序列，以B.subitilis WB800n基因组DNA为模板扩增cotC和cot G基因序列．将PCR扩增所得的cot C、cotG基因片段及其对应的tre S基因片段，利用多片段无缝克隆技术分别连接获得融合基因cot C-tre S及cot G-tre S序列．所用引物见表1，下划线为酶切位点．PCR扩增条件为：95℃预变性3 min，95℃变性15 s，63℃退火15 s，72℃延伸90 s，30个循环；72℃延伸5 min，4℃保存．将PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检验，并使用San Prep柱式DNA胶回收试剂盒进行胶回收，-20℃保存.