《表1 引物及序列：基于退火缓冲液的SLiCE无缝克隆方法的改良》

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《基于退火缓冲液的SLiCE无缝克隆方法的改良》

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注：引物下划线部分是与pUC19载体的同源区域

以来源于E.coli MG1655的可溶性吡啶核苷酸转氢酶（Soluble Pyridine Nucleotide Transhydrogenase，udhA）的基因片段udhA(1 401 bp）作为插入基因，pUC19质粒作为线性化载体的模板。插入DNA片段采用表1的udhA-F和udhA-R引物进行扩增，采用限制性内切酶Eco R I和Bam H I对pUC19质粒进行切割以获得双酶切线性化载体。随后DNA片段都经过乙醇沉淀和胶回收试剂盒（OMEGA）纯化。