《表1 试验用引物信息:大白菜杂交新组合ZF006未成熟杂交种纯度分子标记快速鉴定》

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《大白菜杂交新组合ZF006未成熟杂交种纯度分子标记快速鉴定》


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杂交种纯度鉴定的引物从前期研究[7,8]中筛选,每条染色体上选择2对,共计选择20对引物(表1),委托上海生工生物技术有限公司合成。PCR反应参照张志刚等[8]的方法进行。反应体系(20μL):2×Taq PCR Mastermix10μL,10μmol/L正、反向引物各1μL,DNA模板1μL,灭菌水7μL。PCR反应条件:94℃预变性5 min;94℃变性30 s、59℃退火30 s、72℃延伸10 s,循环35次。PCR扩增在BioRad T 100梯度PCR仪上进行,扩增产物用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显色,数码相机拍照。杂交种纯度=所有中选引物都是杂合带型的种子数目/所有待检种子数目×100%。