《表1 引物序列表：microRNA-513b-5p通过抑制αB-crystallin促进晶状体细胞氧化应激和凋亡》

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《microRNA-513b-5p通过抑制αB-crystallin促进晶状体细胞氧化应激和凋亡》

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4.实时定量PCR（RT-q PCR）:对各组细胞或者组织进行裂解，TRIzol法抽提细胞总RNA，M-MLV反转录试剂盒合成cDNA，miRNA反转录使用mi S-cript反转录试剂盒合成。cDNA特定RNA产物的产量检测使用SYBRGreen Master Mix，U6（miRNA）为内参对miR-513b-5p的表达量进行标准化处理。反应体系（20μl）:10μl SYBR，2.0ng模板cDNA，正反向引物浓度均为20μmol/L，体积为0.8μl，最终使用灭菌蒸馏水加至20μl。PCR过程:40个循环，94℃，1min；54℃，1min；聚合72℃，1min；延伸72℃，7min。引物序列见表1。miR-513b-5p的相对表达使用公式2-ΔΔCt计算。