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目录1

第一章　仪器方法分析1

一、层析1

（一）吸附层析1

1．根据1

2．柱层析2

2．材料3

3．薄层层析5

（二）分配层析12

1．根据12

2．纸层析13

（三）离子交换层析16

1．根据16

2．操作程序17

3．离子交换剂及其选择17

4．交换剂的处理与转型25

5．离子交换柱层析的操作26

（四）排阻层析30

1．根据30

3．凝胶层析35

1．根据42

（五）亲和层析42

2．载体的选择43

3．配基的选择及其与载体的联接43

4．亲和柱层析44

（六）气相层析47

1．根据47

2．气相层析仪器装置47

3．载气48

4．层析柱48

5．担体49

6．固定液50

7．样品50

8．检测系统51

9．定性分析51

10．定量分析52

1．根据54

2．类型54

11．制备性气液层析54

（七）高压液体层析54

3．高压液体层析仪55

4．检测器55

5．常用的担体55

1．根据56

2．仪器56

3．溶剂的选择56

（八）逆流分溶56

6．流动相的选择56

4．溶剂的处理57

（九）膜及空心纤维分离57

1．根据57

2．加速小分子透过膜的方法57

3．常用的材料58

4．膜分离58

5．空心纤维分离59

二、电泳60

2．影响迁移率的因素61

1．迁移率61

（二）迁移率及其影响因素61

（一）基本根据61

3．缓冲液62

4．支持物62

（三）一般技术62

1．装置62

2．支持物的制备和特性62

3．操作程序66

（四）特殊技术67

1．高压电泳67

2．连续电泳68

3．不连续电泳69

4．免疫电泳70

5．等电聚焦70

6．等速电泳71

（五）电泳的应用71

三、光谱72

（一）光谱类型及其应用73

1．原子光谱73

2．分子光谱74

2．仪器装置75

1．根据75

（二）可见和紫外分光光度法75

3．光谱法的用途75

3．应用79

（三）荧光光谱分析法83

1．根据83

2．仪器83

3．应用84

2．仪器种类86

1．根据86

（四）红外分光光度法86

3．应用88

（五）激光拉曼分光光度法88

1．根据88

2．应用88

（六）火焰分光光度法88

1．根据88

2．仪器装置88

2．检测依据91

1．基本概念91

（七）电子自旋共振波谱法91

3．ESR波谱仪的基本结构92

4．应用94

（八）核磁共振波谱仪95

1．基本概念95

2．检测依据95

3．NMR波谱仪的基本结构97

4．NMR波谱法的应用98

1．基本概念99

（九）质谱法99

3．应用99

2．检测根据100

3．质谱仪的基本结构100

4．质谱法的应用101

（十）旋光谱和圆二色谱法101

1．基本概念102

2．检测的根据102

3．仪器的基本结构103

4．应用104

3．仪器的基本结构105

2．检测的根据105

（十一）光散射法105

1．基本概念105

4．应用106

（十二）极谱分析法106

1．基本概念106

2．检测的根据106

3．仪器的基本结构108

4．应用109

1．分析的依据110

2．分析的方法和理论110

（十三）X-射线衍射结构分析110

四、超速离心115

（一）基本依据115

1．离心力115

2．沉降系数117

3．沉降速度118

4．沉降时间118

5．沉降系数与物质分子量119

（二）仪器的基本结构及操作技术119

1．离心管119

3．制备性超速离心机120

2．转头120

4．分析性超速离心机122

5．超离心法122

6．密度梯度制备123

7．分步收集装置124

（三）应用125

1．分子量的测定126

1．附属部件128

（二）仪器的基本结构与操作128

（一）根据128

五、检压法128

3．大分子构象变化的检测128

2．大分子的纯度鉴定128

2．主要装置129

3．测定方法130

（三）应用133

六、放射性同位素法133

（一）根据133

2．负电子134

1．α粒子134

（三）射线与物质的相互作用134

2．比放射性134

1．居里134

（二）放射性的单位134

3．γ射线135

（四）放射性探测135

1．射线探测器及其种类135

2．照相乳胶爆光法135

3．G-M计数管136

4．闪烁计数器137

5．荧光熄灭的校正141

（四）应用143

七、电子显微镜法143

（一）根据143

（二）电镜的结构及其类型145

1．电镜的结构145

2．电镜的类型145

（三）生物样品的制备146

1．应考虑的因素146

2．支持膜的制备147

3．超薄切片法的操作环节148

4．异丁烯酸酯包埋法149

5．冰冻刻蚀法150

6．琼脂过滤法150

7．负反差法151

8．同位素自显影等方法152

（四）固定液的制备及使用152

1．四氧化锇固定152

2．戊二醛固定152

3．双重固定152

1．DNA的电镜研究153

（五）投影153

（六）应用153

2．核糖体的电镜研究155

第二章　生物大分子的分析157

一、生物大分子的制备157

（一）制备概述157

1．制备的意义157

2．制备的根据157

3．制备方法的分类157

5．制备程序158

4．制备方法的选择158

6．制备过程中的注意事项159

（二）选材与预处理159

1．选材的根据159

2、选材时的注意事项160

3．预处理工作160

（三）细胞器分离160

1．细胞的破碎160

2．细胞器的分离162

1．提取165

（四）生物大分子的制备165

2．分离纯化171

3．浓缩180

4．结晶181

5．干燥184

6．储藏保存185

7．细菌（枯草杆菌）DNA的分离纯化185

8．植物（豆胚芽）DNA的分离纯化188

9．动物（大鼠肝）DNA的分离纯化190

10．大鼠肝nRNA的分离纯化193

11．大肠杆菌tRNA的分离纯化195

12．动物（大鼠肝）rRNA的分离纯化197

13．哺乳动物细胞中mRNA的分离纯化198

二、核酸及核苷酸的分析202

（一）概述202

（二）核酸含量的分析203

1．生物材料中核酸含量的测定203

2．紫外吸收法测定核苷及核苷酸含量206

3．改良苔黑酚法测定RNA的含量219

4．改良二苯胺法测定DNA的含量221

5．定磷法测定核酸含量223

（三）核酸的水解及其组成分析225

1．核酸的水解225

2．酵母RNA的组成成分鉴定226

3．核酸碱基组成的纸层析分析227

4．核苷酸的簿层层析分析229

5．核苷酸的醋酸纤维素簿膜电泳分析231

6．核苷酸的高压纸上电泳分析233

7．核苷酸的过碘酸氧化法定量分析235

8．核苷酸的离子交换柱层析分离分析237

1．RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳241

（四）核酸大分子的分离分析241

2．DNA的琼脂糖凝胶电泳243

3．噬菌体λDNA的酶解片段分离分析246

5．细胞核及染色质的分离分析260

6．细胞核DNA生物活性分析264

7．RNA的蔗糖密度梯度离心266

4．质粒DNA的分离纯化及分析268

8．DNA氯化铯密度梯度离心268

1．氨基酸共有的显色分析法271

三、蛋白质及氨基酸的分析271

（一）氨基酸的定性分析271

2．特殊氨基酸的分析法272

（二）氨基酸的定量分析288

1．氨基酸通用的定量分析法288

2．特殊氨基酸的定量分析298

（三）蛋白质的定性分析321

1．蛋白质共有的显色分析法321

2．复合蛋白质的显色反应322

1．蛋白质总氮量的测定——凯氏定氮法323

（四）蛋白质的定量分析323

2．蛋白质溶液浓度测定法325

（五）蛋白质纯度分析328

1．聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法328

2．醋酸纤维素簿膜电泳法331

3．等电聚焦电泳法333

（六）蛋白质分子量测定法335

1．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法335

2．凝胶柱层析法339

3．凝胶薄层层析法341

4．聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法347

（七）蛋白质末端分析351

1．蛋白质NH2末端氨基酸分析351

2．蛋白质COOH-末端氨基酸分析373

（八）血清蛋白质的测定376

1．血清总蛋白 白蛋白及球蛋白的测定376

2．血清丙种球蛋白测定379

3．血清粘蛋白测定380

4．血清蛋白质的纸电泳分析382

四、酶的活性测定384

（一）概述384

1．酶活性测定的重要意义385

2．酶活性的定义386

3．酶的分类386

4．酶活力测定的常用仪器388

（二）几种重要酶的活力测定388

1．胰蛋白酶活力测定388

2．限制性内切酶EcoRI的活力测定389

3．酰化酶的活力测定391

4．辣根过氧化物酶活力测定392

5．过氧化氢酶活力测定395

6．超氧化物歧化酶的活性测定396

7．双磷酸核酮糖羧化酶活力测定398

（三）临床诊断用酶测定技术400

1．临床诊断常用酶400

2．谷丙转氨酶活力测定400

3．乳酸脱氢酶活力测定402

4．血清精氨酸酶测定403

5．血清肌酸磷酸激酶测定406

6．血清淀粉酶活力测定409

7．血清胆碱酯酶活力测定411

8．血清醛缩酶活力测定415

9．碱性磷酸脂酶活力测定419

10．临床诊断用酶试剂423

（四）工业酶活性测定428

1．工业上常用酶428

2．蛋白酶活力测定428

3．胰蛋白酶活力测定（药用）430

4．胃蛋白酶活力测定（药用）430

5．糖化型淀粉酶活力测定431

6．液化型淀粉酶活力测定433

7．葡萄糖异构酶活力测定434

8．纤维素酶活力测定437

9．果胶酶活力测定439

10．黄嘌呤氧化酶活力测定440

11．磷酸二酯酶活力测定441

12．尿素酶（尿酶）活力测定442

13．木瓜蛋白酶活力测定444

（五）同工酶的测定445

1．同工酶及测定同工酶的意义445

2．39种不同酶的同工酶检测技术445

3．几种重要酶的同工酶测定464