《靶向新基因的分子克隆策略 理论与方法》求取 ⇩

第一章　PCR程序与条件优化1

第1节　PCR的理论知识1

第2节　用超长PCR法从基因组DNA中扩增长片段11

第3节　用Tub DNA聚合酶自少量基因组DNA扩增5kb以下的DNA序列18

第4节　触减PCR或步减PCR法：一步优化23

第5节　RT—PCR一步法克隆cDNA大片段27

第二章　PCR产物的克隆34

第1节　利用T4 DNA聚合酶产生可直接克隆的PCR产物34

第2节　不需连接酶的快速亚克隆法38

第3节　利用突出的T/A克隆PCR产物44

第4节　应用Xcm Ⅰ酶切位点制备T载体50

第5节　应用T连接子策略修饰和定向克隆PCR产物55

第三章　突变、重组和体外选择64

第1节　重组PCR介导的基因重组及定点突变64

第2节　DNA的体外重组与突变：用重叠区扩增法进行基因拼接69

第3节　应用PCR插入子对合成基因进行框架内克隆74

第4节　用巨型引物PCR方法进行基因突变和基因融合82

第5节　单个反应管内完成快速、有效的基因突变86

第6节　用耐热连接酶制造突变91

第7节　用三步PCR介导接头分区诱变94

第8节　Flip-PCR介导序列倒置97

第9节　SELEX组合分析——寻找高亲和力核酸配体的方法99

第四章　相邻未知DNA的克隆113

第1节　快速扩增cDNA末端：RACE策略113

第2节　单侧特异性PCR扩增基因调控区116

第3节　用末端修饰法扩增cDNA相邻序列和基因组片段120

第4节向第一链cDNA 3′端锚着固定序列：在克隆稀有全长mRNA中的应用129

第5节　用欢乐PCR法在DNA克隆内快速定向移行138

第6节　反式PCR：克隆cDNA末端的有效方法141

第7节　用锚着PCR从基因组文库中快速扩增基因末端144

第8节　用外显子扩增法从酵母人工染色体（YAC）中分离外显子序列147

第五章　文库构建与筛选162

第1节　用磁珠和PCR方法自小量RNA构建cDNA文库162

第2节　通过对cDNA群体的顺次细分法提高低丰余度cDNA的平均丰余度169

第3节　用少量细胞构建cDNA文库178

第4节　应用非放射性方法对重组文库进行快速筛选184

第5节　用PCR筛选cDNA文库189

第6节　用亚文库法对稀有克隆进行富集和筛选190

第六章　PCR在差异显示和减法技术中的应用201

第1节　用分子选择法对cDNA序列丰度进行正常化201

第2节　用磁珠和PCR进行减法cDNA克隆208

第3节　扣除cDNA的PCR更新法218

第4节　应用PCR进行cDNA文库的差式筛选228

第5节　用DDRT-PCR鉴定和克隆差异表达的基因235

第6节　基因组扣除方案243

第7节　DNA/RNA指纹图：任意引物PCR法（AP-PCR）249

第七章　基因家族成员的克隆265

第1节　用简并寡核苷酸引物和PCR克隆基因家族成员265

第2节　具最低序列相似性的基因扩增：次黄核苷酸在简并引物中的应用272

第3节　如何设计用于扩增基因家族中特定成员或亚群的PCR引物276

第4节　根据统计学资料设计引物282

附录1　DNA片段末端内切酶切割效率290

附录2　不同物种对密码子使用的偏向性比较292