《感染症免疫诊断技术》求取 ⇩

第一篇感染症免疫诊断技术基本知识1

一、感染症发展变化及诊断技术的发展1

(一)感染症1

1.感染症仍属危害人类的重要疾病1

2.对感染症的认识2

3.感染症病原微生物的概念4

4.考虑感染症对策中须注意的问题4

5.感染症的诊断5

(二)感染症诊断技术的发展5

1.显微镜检查法6

2.细菌分离培养法6

3.免疫学检查法11

4.鸟嘌呤(G)加胞嘧啶(C)的摩尔百分数法13

5.气、液相色谱法(GLC)14

6.去氧核糖核酸探针法(DNA-probe)16

二、人体免疫反应21

(一)体液免疫22

(二)细胞免疫26

三、抗原及抗体28

(一)抗原28

(二)抗体及免疫球蛋白30

四、抗原抗体反应37

(一)抗原抗体反应的基本性质37

1.抗原抗体结合力的性质37

2.抗原抗体结合物的解离38

3.简单半抗原与抗体的结合39

4.抗原抗体结合部位39

5.抗原抗体反应的特异性和亲和性40

6.可溶性多价抗原与抗体间的沉淀反应41

7.抗原抗体反应的可逆性和不可逆性42

8.对抗原抗体反应的影响因素43

9.抗原的免疫活性及生物活性44

(二)机体外抗原抗体间相互作用45

1.沉淀反应45

2.放射活性结合法48

3.免疫荧光法50

4.同细胞表面抗原的反应52

五、感染症免疫诊断原理55

(一)以抗血清作为试剂的方法55

(二)以抗原作为试剂的方法56

(三)作为诊断法的细胞免疫检查58

(四)免疫诊断试验的敏感性和特异性59

(五)各种感染症的主要检查法及参考数据61

六、免疫球蛋白制剂制备原理65

(一)利用物理化学特性来提取纯化免疫球蛋白(Ig)制剂66

(二)根据Ig在机体正常或病态下的特点制备免疫球蛋白制剂68

(三)利用同免疫球蛋白的亲和性制备或检查免疫球蛋白69

(四)使用免疫球蛋白制剂或检查免疫球蛋白时应注意的问题69

七、单克隆抗体和免疫测定73

(一)单克隆抗体原理及其用途73

1.动物抗血清存在的问题73

2.单克隆抗体的特点74

3.应用单克隆抗体研究各种微生物75

4.应用单克隆抗体存在的问题77

1.单克隆抗体应用于免疫测定的优越性78

(二)单克隆抗体免疫测定新技术78

2.适用于免疫测定的单克隆抗体80

3.单克隆抗体免疫测定法的特点82

4.抗菌单克隆抗体的发展趋势85

八、感染中的免疫复合物88

(一)免疫复合物形成与致病89

(二)与感染有关的免疫复合物病92

1.细菌性感染92

2.病毒性感染100

3.寄生虫感染102

(三)免疫复合物检测原则103

九、感染症与C反应性蛋白(CRP)110

(一)各种感染症等疾病的C反应性蛋白水平110

(二)C反应性蛋白的结构与结合特性112

(三)C反应性蛋白与某些细菌结合的特性113

(四)C反应性蛋白的检查方法及试剂制备113

十、葡萄球菌蛋白A及其制剂116

(一)葡萄球菌蛋白A(SpA)及其在免疫测定方面的应用116

1.蛋白A的存在情况117

2.带蛋白A葡萄球菌的培养119

3.蛋白A在金黄色葡萄球菌体上的部位120

4.葡萄球菌蛋白A的物理化学性质121

5.葡萄球菌蛋白A的氨基酸组成及结构122

6.葡萄球菌蛋白A与免疫球蛋白的反应性122

7.葡萄球菌蛋白A与人体免疫球蛋白125

8.葡萄球菌蛋白A在免疫诊断等方面的应用128

1.产生蛋白A的葡萄球菌菌株的选择方法130

(二)葡萄球菌蛋白A(SpA)试剂的制备和用途130

2.蛋白A的提取纯化法133

3.各种SpA试剂的制备及其用途135

第二篇各种感染症免疫诊断139

十一、细菌感染症139

(一)葡萄球菌感染症139

(二)链球菌感染症145

1.A群链球菌感染症146

2.B群及A、B群以外链球菌感染症147

3.A群链球菌成分及菌体外抗原147

(三)流感嗜血杆菌感染症免疫诊断法154

1.关于HIB脑脊髓膜炎免疫诊断方法155

2.病原菌快速诊断法的问题160

3.特异性抗原PRP的制备161

(四)化脓性脑膜炎快速诊断法165

(五)流行性脑脊髓膜炎169

(六)绿脓杆菌感染172

(七)白喉173

1.基本特征174

2.免疫诊断175

(八)百日咳176

1.基本特征176

2.免疫诊断177

(九)军团菌病179

1.概述179

2.免疫诊断方法181

(十)肠伤寒症184

1.免疫诊断185

2.检查结果的分析186

(十一)肠伤寒以外的沙门氏菌感染187

(十二)大肠杆菌感染症189

1.大肠杆菌与感染性肠炎189

2.大肠杆菌肠道外感染症191

(十三)细菌性痢疾192

(十四)霍乱193

1.免疫检菌法194

2.SpA-协同凝集试验194

3.ELISA法检测霍乱肠毒素195

(十五)空肠弯曲菌病196

1.弯曲菌病临床症状196

2.荧光抗体法196

1.基本特征198

(十六)小肠结肠炎耶尔森氏菌病198

2.免疫诊断199

(十七)厌氧菌感染201

(十八)梭状芽孢杆菌感染症204

1.气性坏疽菌群和感染症206

2.破伤风菌和破伤风感染症208

3.肉毒梭菌感染210

4.细菌免疫学诊断211

(十九)假膜性结肠炎211

1.临床211

2.细菌学诊断212

3.检查难辩梭状芽孢杆菌毒素的特异性方法213

1.基本特征216

(二十)布鲁氏菌病216

2.免疫诊断217

(二十一)鼠疫219

1.被动血球凝集试验220

2.关于免疫诊断的其他方法224

(二十二)炭疽225

1.基本特征225

2.免疫诊断226

(二十三)李司忒菌病228

(二十四)土拉伦菌病230

1.土拉伦菌病临床症状230

2.血清学检查法231

3.迟发性过敏反应试验233

1.免疫学诊断法234

(二十五)马鼻疽症234

2.检查结果的分析237

(二十六)钩端螺旋体病238

1.基本特征238

2.免疫诊断239

(二十七)莱姆(Lyme)病242

1.基本特征242

2.免疫诊断243

(二十八)梅毒245

1.基本特征245

2.免疫诊断246

(二十九)结核病248

1.基本特征248

2.免疫诊断249

(三十)麻风251

1.基本特征251

2.免疫诊断252

(三十一)支原体感染症及免疫诊断254

1.支原体感染检查法255

2.关于支原体抗体的意义264

(三十二)内毒素血症及检查法268

十二、病毒感染症277

(一)病毒感染症的免疫诊断277

1.检测抗体277

2.病毒感染症中的抗体反应278

(二)水痘-带状疱疹281

1.感染症281

2.免疫学诊断282

3.ELISA法测定水痘-带状疱疹病毒抗体283

4.对实验结果的分析284

(三)巨细胞病毒感染症285

1.间接荧光抗体和抗补体免疫荧光试验286

2.间接血凝试验286

3.ELISA试验288

(四)EB病毒感染症289

1.EB病毒的相关抗原及抗体检测方法概况290

2.间接荧光抗体试验检测VCA抗体291

3.核抗原抗体的检测——抗补体荧光技术292

4.嗜异性抗体的检测293

(五)呼吸道合胞病毒和副流感病毒感染症294

1.补体结合试验295

3.中和试验296

2.血凝抑制试验296

(六)腺病毒感染症299

1.补体结合试验300

2.ELISA试验301

3.血凝抑制试验302

4.血清中和试验302

(七)麻疹和腮腺炎303

1.血凝抑制试验305

2.中和试验306

(八)风疹病毒感染症306

1.辐射状溶血试验307

2.血凝抑制试验308

4.试剂的制备309

3.其他方法309

5.结果分析310

(九)虫媒病毒感染症310

1.常用的免疫诊断方法311

2.方法的选择313

3.抗原和抗血清的制备314

(十)病毒性肝炎315

1.甲型肝炎315

2.乙型肝炎318

3.D型肝炎322

(十一)病毒性腹泻323

1.抗原检测324

2.抗体检测325

4.底物的配制327

3.生物素标记免疫球蛋白方法327

十三、真菌感染症331

(一)新型隐球菌病331

1.概述331

2.临床症状331

3.免疫学诊断332

(二)念珠菌病337

1.概述337

2.临床症状337

3.免疫学诊断338

(三)孢子丝菌病344

1.概述344

2.临床症状344

3.免疫学检查345

(四)曲霉菌病346

1.概述346

2.临床症状347

3.免疫学检查347

(五)组织胞浆菌病349

1.概述349

2.临床症状349

3.免疫学诊断349

(六)球孢子菌病352

1.概述352

2.临床症状352

3.免疫学检查353

1.概述355

(七)着色真菌病355

2.临床症状356

3.免疫学检查356

(八)芽生菌病356

1.概述356

2.临床症状356

3.免疫学检查357

(九)副球孢子菌病358

1.概述358

2.临床症状358

3.免疫学检查359

1.概述360

2.临床症状360

(十)青霉菌病360

3.免疫学检查361

(十一)深部真菌病的皮肤试验361

(十二)一项新的特异性诊断试验——外抗原试验362

十四、立克次体病的免疫诊断364

(一)检测血清中立克次体抗体365

1.间接免疫荧光法(IFA)365

2.间接血凝试验(IHA)367

3.乳胶凝集试验(LA)369

4.免疫酶联吸附试验(ELISA)370

5.补体结合试验(CF)371

6.微量凝集试验(MA)374

7.外斐氏试验375

8.间接免疫酶标染色法(IP)376

(二)组织活检377

十五、衣原体病的免疫学诊断379

(—)衣原体的血清学诊断379

1.补体结合试验380

2.微量免疫荧光法382

(二)细胞涂片或组织切片检查384

1.免疫荧光法384

2.Giemsa染色法385

3.碘染色法385

附录 各种感染症免疫诊断方法387

第三篇感染症免疫诊断技术401

十六、免疫诊断技术概要401

(一)免疫沉淀402

1.单向放散免疫扩散法(SRID)402

2.免疫电泳403

(二)凝集反应405

1.细菌凝集试验406

2.血球凝集试验406

3.胶乳凝集及凝集抑制试验406

4.SpA凝集试验407

5.颗粒放大免疫测定407

(三)与补体有关的检测法409

(四)标记免疫测定法409

1.非同位素标记免疫测定法410

2.异质性免疫测定412

3.均质性免疫测定414

(五)免疫传感器测定法421

3.免疫反应器型传感器422

1.电极型免疫传感器422

2.酶免疫传感器422

4.脂质体免疫传感器423

5.光免疫传感器423

6.其他424

十七、非标记免疫诊断法426

(一)单向放散免疫扩散法(SRID)426

1.测定原理426

2.测定方法429

3.存在的问题431

(二)免疫电泳法432

1.测定原理433

2.测定方法434

1.器材和试剂438

(三)对流免疫电泳试验438

2.操作方法及结果判断439

(四)光散射测定法441

1.光散射测定原理441

2.测定法的应用443

3.测定中存在的问题444

(五)抗球蛋白试验(Coombs试验)445

1.原理与目的445

2.抗球蛋白试验方法447

3.布氏菌病血清中不完全抗体检查法448

4.抗球蛋白血清制备449

(六)补体结合试验450

1.培养基及试剂460

(七)被动免疫溶血反应(PIH)460

2.被检材料的调制461

3.实验方法462

4.结果判定463

5.应注意之点463

十八、标记法免疫测定465

(一)放射免疫分析465

1.材料和试剂的准备465

2.测定方法的种类及基本原理469

3.方法实例470

(二)荧光抗体技术476

1.酶免疫测定法(EIA)的种类488

(三)酶免疫测定法488

2.酶免疫测定的原理490

3.几种测定方法的操作程序491

4.材料和试剂494

5.固相载体及可吸附于载体的材料495

6.辣根过氧化物酶抗体结合物的制备496

7.ELISA法中的干扰现象499

8.细菌性感染的酶免疫测定500

(四)生物素-亲和素系统(BAS)原理及使用方法501

1.原理501

2.使用方法502

(五)化学、生物发光免疫测定503

(六)免疫印迹法504

1.原理509

(七)免疫学的定量测定法509

2.竞争法512

3.非竞争测定法515

十九、皮肤试验检查法517

(一)皮肤试验517

(二)速发性过敏症的诊断517

(三)迟发性过敏症的诊断519

二十、感染症诊断中病因微生物抗原或毒素物质等的快速免疫诊断法522

(一)微生物抗原检测法的特点522

(二)抗原检测法存在的问题523

(三)感染症抗原检测诊断例症524

1.流感嗜血杆菌抗原检测524

3.流行性脑脊髓膜炎525

2.肺炎链球菌肺炎525

4.淋病诊断528

5.葡萄球菌抗原检查529

6.内毒素血症的检查530

7.难辨梭菌毒素检查531

8.肉毒梭菌食物中毒531

9.肠毒素原性大肠菌定居因子(CFA／I)的检查532

10.霍乱弧菌肠毒素的检查法532

11.隐球菌感染症抗原检查法533

12.轮状病毒电镜检查法534

13.乙型肝炎抗原检测534

14.免疫复合物中抗原检查534

15.Becet＇s病检查535

16.有希望以检查抗原进行诊断的其他感染症535

(一)毒素的免疫学检查法537

二十一、微生物毒素的免疫学检查法537

(二)Elek法及其改良法539

(三)葡萄球菌蛋白A协同凝集反应540

(四)用ELISA法检查肠毒素542

二十二、免疫复合物的检测方法545

(一)关于免疫复合物中的抗原检定法545

1.外因性抗原546

2.内因性抗原546

(二)单克隆类风湿因子法(mRF)552

1.mRF精制法552

2.亲和层析法552

3.测定方法553

(三)用抗-抗体法检查免疫复合物553

1.抗-抗体筛选方法554

2.用抗-抗体法检查免疫复合物555

二十三、其他有关技术方法556

(一)细菌尿简易证明法556

1.TTC还原法556

2.亚硝酸盐试验556

3.微量尿糖检查法557

4.培养法557

5.抗体包被细菌的检查557

6.过氧化氢酶试验法558

7.感染症病人脑脊髓膜炎脑脊液中蛋白质、糖及乳酸水平检查558

(二)硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验559

1.NBT试验种类和方法559

2.观察结果561

1.保罗-邦内尔方法563

(三)保罗-邦内尔试验563

2.Davidsohn吸收试验564

(四)亲和层析技术565

1.亲和层析原理565

2.亲和层析用试剂制备565

(五)杂交瘤技术及单克隆抗体制备技术569

1.单克隆抗体制作原理及制备程序570

2.HAT-RPMI-1640培养基培养杂交瘤细胞的原理570

3.特异性抗体生成的杂交瘤细胞筛选方法573

4.免疫细胞和淋巴细胞融合技术573

5.融合细胞克隆化575

6.可用于融合的骨髓瘤细胞株576

7.细胞系培养生长传代方法577

8.瘤细胞保存方法578

9.骨髓瘤细胞传代用培养基579

10.细胞融合用培养基及有关试剂和方法581

附录Ⅰ常用缓冲液586

(一)磷酸盐缓冲液586

(二)巴比妥缓冲液588

(三)碳酸盐缓冲液589

(四)醋酸缓冲液591

(五)硼酸缓冲液591

(六)枸橼酸缓冲液592

(七)Tris(三羟甲基氨基甲烷)缓冲液594

(八)甘氨酸缓冲液595

(九)邻苯二甲酸缓冲液596

(十)琥珀酸-NaOH缓冲液597

附录Ⅱ 感染症免疫诊断技术目录599