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第一章 概论 陈啸梅、周文郁1

一、组织化学方法的种类1

二、组织化学技术的基本要求2

三、组织化学的进展2

主要参考文献3

第二章 组织化学技术 陈啸梅、王乃英5

第一节 固定5

一、固定的目的5

二、固定的方法和固定液的选择5

(二) 脂类6

(一) 多糖6

(三) 核蛋白及核酸7

(四) 酶7

第二节 切片的制备10

一、冰冻切片10

(一) 冰冻切片机切片10

(二) 半导体致冷切片11

(三) 恒冷箱切片11

二、冰冻干燥14

三、冰冻替代法16

(二) Baker氏甲醛钙液17

(一) 磷酸缓冲中性甲醛(10%)17

附：固定液及制片方法17

一、固定液17

(三) Gendre氏液18

(四) Carnoy氏液18

(五) Lillie氏A.A.F.液18

(六) 粘多糖和粘液物质固定液18

(九) 酸性缓冲丙酮19

(十) 蒸气固定19

(十一) 4%甲醛液19

(八) 甲醛-蔗糖-氨水液(示胆碱酯酶 ChE)19

(七) 显示SH基固定液19

(十二) 4%多聚甲醛/0.1M磷酸缓冲液20

(十三) 4%多聚甲醛/0.1M二甲胂酸缓冲液20

(十四) 2.5%戊二醛/0.1M磷酸缓冲液或0.1M二甲胂酸缓冲液20

(十五) 4%多聚甲醛+2.5%戊二醛/0.2M二甲胂酸缓冲液20

(十六) 四氧化锇的配制方法20

二、制片方法23

(一) 冰冻替代技术23

(二) 切片替代技术(Patten及Nown,1958;Chang及Hori,1961)24

主要参考文献26

(三)切片替代技术(Chang及Yokayama,1970)26

第一节 蛋白质的分类28

一、简单蛋白质28

二、结合蛋白质28

第二节 个别氨基酸的鉴别28

第三章 蛋白质 陈啸梅28

一、二硝其氟苯法30

二、米伦氏反应30

三、硫氢基与二硫键的显示30

四、精氨酸32

一、碱性固绿法33

第三节 组蛋白33

二、铵银法34

三、肝素-爱尔蓝(HAB)法34

附：蛋白质的显示方法34

一、 二硝基氟苯(DNFB)法34

二、米伦反应示酪氨酸36

三、铁氰化铁法示SH基37

四、碱性四唑盐示SH基及S-S键38

五、汞橙(RSR)法示SH基38

七、坂口反应示精氨酸40

六、组化坂口反应示精氨酸40

八、碱性固绿法42

九、肝素-爱尔蓝(HAB)染色法43

主要参考文献45

第四章 核酸 陈啸梅、朱蓬第47

第一节 Schiff试剂47

第二节 Feulgen反应示DNA48

第三节 核酸与碱性染料50

一、甲基绿-焦宁法50

二、甲苯胺蓝-钼酸盐法51

一、Feulgen反应52

附：核酸的显示方法52

二、三氯醋酸-Feulgen-固绿54

三、甲基绿-焦宁及RNase法示RNA55

四、甲基绿-焦宁技术57

五、甲苯胺蓝法示核糖蛋白58

六、提取方法59

(一) 提取DNA59

(二) 提取RNA60

主要参考文献61

二、粘液物质64

一、多糖64

第一节 分类64

第五章 糖类 陈啸梅64

三、糖蛋白65

四、粘液脂类65

第二节 保存方法66

第三节 糖原66

一、过碘酸-Schiff(PAS)反应原理67

二、酶消化法69

第四节 酸性粘液物质及异色性染色69

(一) 阳离子染料70

一、阳离子基团70

(二) 金属阳离子71

二、荧光抗体法71

三、同位素标记71

附：糖类的显示方法72

一、PAS反应72

二、三茂铁甲基羧基酰肼显示糖原74

三、爱尔蓝示酸性粘液物质(CEC法)76

四、爱尔蓝示中性及酸性粘液物质77

五、渗析铁法示酸性粘液物质78

六、甲苯胺蓝法79

七、甲酸-结晶紫法示类淀粉80

主要参考文献81

第六章 脂类 陈啸梅83

第一节 固定83

第二节 脂类的显示方法84

一、物理方法显示脂类85

二、化学方法显示脂类86

三、选择性提取89

四、脂类电镜组化89

五、组织中的脂色素90

附：脂类的显示方法91

一、溴-苏丹黑法示脂类92

二、油红O示中性脂肪93

三、酸性氧化苏木精示磷脂94

四、氢氧化钠-酸性氧化苏木精法示神经磷脂96

五、硫酸尼罗蓝示酸性及中性脂类96

六、丙酮-硫酸尼罗蓝法示磷脂97

七、铜-红氨酸法示游离脂肪酸98

八、Schultz反应示胆固醇99

九、过氯酸-萘醌(PAN)法示胆固醇100

十、酶的方法示胆固醇及胆固醇酯100

十二、尼罗蓝示黑色素及脂褐素102

十一、胞浆反应示缩醛磷脂102

主要参考文献103

第七章 酶 陈啸梅105

第一节 酶的保存及影响酶活性的因素105

第二节 酶的组化方法107

一、沉淀反应107

(一) 金属阳离子沉淀反应107

(二) 偶联偶氮沉淀反应108

二、电子传递的方法110

三、漂浮保温法111

四、环、框技术111

一、盖片染色缸法111

二、滴加作用液法111

第三节 组化示酶的保温技术111

五、半透膜技术112

第四节 酶的超微细胞化学112

第五节 同功酶115

主要参考文献115

第八章 水解酶 陈啸梅117

第一节 磷酸酶类117

一、碱性磷酸酶117

二、酸性磷酸酶121

三、5＇-核苷酸酶123

四、葡萄糖-6-磷酸酶124

五、腺苷三磷酸酶125

六、腺苷酸环化酶127

七、核苷二磷酸酶128

八、硫胺素焦磷酸酶128

第二节 羧酯水解酶129

一、非特异性酯酶130

二、胆碱酯酶131

(一) 乙酰胆碱酯酶131

(二) 胆碱酯酶132

第三节 亮氨酸氨基肽酶133

第四节 β-葡糖苷酸酶134

一、铁羟基喹啉法135

二、偶联偶氮法135

附：水解酶的显示方法136

一、钙-钴法示碱性磷酸酶136

二、偶联偶氮(同时偶联)法示碱性磷酸酶137

三、柠檬酸铅法示碱性磷酸酶(EM)139

四、硫化铅法示酸性磷酸酶(Gomori,1950)141

五、硫化铅法示酸性磷酸酶(Chang,1980)143

六、偶联偶氮法示酸性磷酸酶145

七、锇桥连技术示酸性磷酸酶(EM)147

八、铅法示5＇-核苷酸酶149

九、硫化铅法示葡萄糖-6-磷酸酶151

十、硫化铅法示葡萄糖-6-磷酸酶153

十一、钙激活的腺苷三磷酸酶154

十二、镁激活的腺苷三磷酸酶155

十三、钠、钾激活的腺苷三磷酸酶157

十四、钠-钾腺苷三磷酸酶(EM)158

十五、线粒体腺苷三磷酸酶(EM)161

十六、铅法示腺苷酸环化酶162

十七、铅法示核苷二磷酸酶164

十八、铅法示硫胺素焦磷酸酶165

十九、膜技术示总非特异性酯酶167

二十、同时偶联法示非特异性酯酶168

二十一、酸性酯酶显示法170

二十二、亚铁氰化铜法示乙酰胆碱酯酶172

二十三、铜-铅-硫胆碱技术示乙酰胆碱酯酶及胆碱酯酶(EM)175

二十四、氨基肽酶176

二十五、同时偶联法示β-葡糖苷酸酶177

主要参考文献179

第一节 细胞色素氧化酶183

第九章 氧化酶与过氧化物酶 陈啸梅183

第二节 DOPA氧化酶184

第三节 DOPA胺-β-羟化酶(DBH)185

第四节 单胺氧化酶(MAO)185

第五节 过氧化物酶187

附：氧化酶与过氧化物酶的显示方法188

一、细胞色素氧化酶188

二、二氨基联苯胺法示细胞色素氧化酶(Seligman等，1968)189

三、二氨基联苯胺法示细胞色素氧化酶(Novikoff及Goldfischer,1969)191

四、DOPA氧化酶192

五、四唑盐法示单胺氧化酶193

六、亚铁氰化铜法示单胺氧化酶194

七、嗜锇四唑盐法示单胺氧化酶(EM)195

八、二氨基联苯胺法示过氧化物酶197

九、二氨基联苯胺法示过氧化物小体198

十、髓性过氧化物酶的显示199

十一、辣根过氧化物酶示踪法200

主要参考文献202

第十章 脱氢酶及四唑还原酶 陈啸梅204

第一节 四唑盐204

第二节 脱氢酶的一般组化207

一、琥珀酸脱氢酶209

第三节 不需辅酶的脱氢酶209

二、甘油-3-磷酸脱氢酶210

第四节 四唑还原酶211

第五节 需辅酶的脱氢酶212

一、尿核苷二磷酸葡糖脱氢酶212

二、羟基甾体脱氢酶212

三、甘油-3-磷酸脱氢酶214

四、谷氨酸脱氢酶215

五、异柠檬酸脱氢酶216

六、乳酸脱氢酶216

七、葡糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡糖酸脱氢酶218

八、苹果酸脱氢酶219

九、苹果酸脱氢酶220

附：脱氢酶及四唑还原酶的显示方法220

一、结合酶的标准方法220

二、可溶性酶的标准方法223

三、琥珀酸脱氢酶224

四、亚铁氰化铜法示琥珀酸脱氢酶(EM)226

五、BSPT示琥珀酸脱氢酶(EM)227

六、尿核苷二磷酸葡糖脱氢酶229

七、3β-羟基甾体脱氢酶230

八、谷氨酸脱氢酶231

九、乳酸脱氢酶显示法233

十、明胶凝胶作用液示乳酸脱氢酶235

十一、锇桥连技术示乳酸脱氢酶(EM)236

十二、嗜锇四唑盐示乳酸脱氢酶(EM)240

十三、PVA法示乳酸脱氢酶同功酶242

十四、葡糖-6-磷酸脱氢酶244

十五、苹果酸脱氢酶245

主要参考文献247

第一节 胆碱乙酰化酶250

第十一章 转移酶 陈啸梅250

第二节 肉毒碱乙酰化酶251

第三节 γ-谷氨酰转肽酶252

第四节 磷酸化酶253

附：转移酶的显示方法254

一、胆碱乙酰化酶254

二、亚铁氰化铀法示肉毒碱乙酰化酶255

三、镉法示肉毒碱乙酰化酶258

四、γ-谷氨酰转肽酶259

五、γ-谷氨酰转肽酶(EM)260

六、磷酸化酶262

第十二章 生物胺荧光组织化学技术 彭俊云266

一、甲醛诱发生物单胺荧光化学反应267

第一节 甲醛、乙醛酸诱发生物单胺荧光化学反应原理267

二、乙醛酸诱发生物单胺荧光化学反应269

第二节 生物单胺递质荧光的鉴别271

二、醛类诱发生物单胺递质荧光团的荧光与组织内自发荧光的区别272

(一) 氢硼化物反应区别法272

(二) 紫外光照射区别法272

(二) 荧光显微分光光度计区别法272

(一) 滤光片区别法272

一、生物单胺递质荧光团之间的区别272

(三) 水淬灭荧光区别法273

(四) 空白对照区别法273

第三节 邻苯二醛显示组织胺荧光法273

第四节 荧光显微镜观察和照相274

一、荧光显微镜观察274

二、照相276

附：生物胺荧光显示法277

一、甲醛诱发生物单胺递质荧光法277

(一) 冰冻干燥、甲醛蒸气诱发荧光石蜡切片法显示生物单胺递质277

(二) 薄膜组织铺片甲醛诱发荧光法显示生物单胺递质280

(一) 恒冷箱切机切片乙醛酸诱发荧光法显示生物单胺递质281

二、乙醛酸诱发生物单胺递质荧光法281

(二) 薄膜组织铺片乙醛酸诱发荧光法显示生物单胺递质282

三、铝-甲醛显示生物单胺递质荧光组织化学技术284

(一) 铝-甲醛冰冻干燥石蜡切片法显示生物单胺递质284

(二) 铝-甲醛恒冷箱切片机切片法显示生物单胺递质288

四、氢硼化钠特殊试验289

五、邻苯二醛显示组织胺荧光法290

六、恒冷箱切片机切片的CA与多巴胺β-羟化酶的连续显示法292

七、去甲肾上腺素和乙酰胆碱酯酶的同时显示法294

八、乙醛酸诱发儿茶酚胺荧光和乙酰胆碱酯酶连续显示法295

主要参考文献297

第十三章 免疫组织化学方法 周文郁299

第一节 荧光抗体法299

一、荧光抗体法的原理300

二、荧光染色液的制备302

(一) 免疫球蛋白(IgG)的调制302

(二) 荧光素及其标记原理304

(三) 标记荧光素的具体步骤(以FITC为例)306

(四) 非特异染色的去除307

(五) 荧光抗体液的检定309

三、染色标本的准备310

(一) 荧光染色的注意事项312

四、染色312

(二) 染色方法与步骤313

(三) 对照染色315

五、荧光显微镜观察及其在组化定位中的应用316

第二节 酶标抗体法316

一、酶标抗体液的制备317

(一) 免疫球蛋白(IgC)的调制317

(二) 标记用的酶及其纯化方法318

(三) 标记与精制的方法320

(四) 酶标抗体液的检定322

(一) 固定323

二、组织材料的处理323

(二) 切片325

三、染色325

(一) 光学显微镜标本的染色325

(二) 电镜标本的染色328

(三) 对照染色法329

四、镜检时注意事项329

主要参考文献330

第十四章 定量组织化学技术--显微分光光度测量法 周文郁331

一、原理331

二、显微分光光度测量法的特殊性333

三、几种常用的显微分光光度测量法简介334

(一) 固定光束测定法334

(二) 单光束扫描测定法340

四、标本的处理344

(一) 组织或细胞的处理344

(二) 载玻片、盖玻片及封固剂345

主要参考文献346

附录 陈啸梅、周文郁、彭俊云、朱蓬弟、王乃英347

一、国际原子量表(1961)347

二、克分子(M)和当量(N)溶液350

三、缓冲液355

四、包埋、切片方法366

五、本书所用非组化方法的染液配制369

六、封固剂372

七、酶的组化方法一览表373

八、四唑盐缩写、化学名、俗名及分子量376

九、本书所用试剂的分子量、厂牌及规格378

十、公制度量衡单位表388

十一、求物质相对含量(M＇)的电子计算机计算程序(BASIC语言)388

十二、英汉名词对照389