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目录1

第1章 序论1

第2章 光镜的酶组织化学6

2·1　酶组织化学的基本理论6

一、一般的基本理论6

二、酶组织化学证明法的基本理论8

2·2　酶组织化学的基本操作酶材料（组织）的处理21

一、固定21

二、冰冻切片和冰冻法22

三、冰冻干燥法23

四、冰冻溶解法24

五、固定-冰冻操作法25

第3章 电镜的酶细胞化学29

一、切片的制作31

3·1　基本操作31

二、固定32

三、浸渍或反应32

3·2　酶活性的检查32

一、氧化还原酶32

二、转移酶40

三、水解酶42

四、裂解酶（裂合酶）51

五、异构酶52

六、连接酶52

第4章 氧化还原酶57

一、四唑盐57

二、电子传递系统和四唑58

三、脱氢酶的标准证明法59

四、白细胞的四唑试验（NBTTest）60

4·1·1　琥珀酸脱氢酶62

4·1　非依赖脱氢辅酶性脱氢酶62

4·1·2　二氢乳清酸脱氢酶64

4·1·3　氨基酸脱氢酶64

4·1·4　L-古洛糖酸内酯氧化酶65

4·1·5　胆碱脱氢酶66

4·2　NAD依赖性脱氢酶68

4·2·1　（乙）醇脱氢酶次级醇脱氢酶69

4·2·2　α-磷酸甘油脱氢酶69

4·2·3　D-木酮糖脱氢酶69

4·2·4　山梨醇脱氢酶69

4·2·5　尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶70

4·2·6　乳酸脱氢酶混合薄膜培养法71

4·2·7　β-羟基丁酸脱氢酶73

4·2·8　苹果酸脱氢酶73

4·2·10　3-磷酸甘油醛脱氢酶74

4·2·9　甜菜醛脱氢酶74

4·2·11　谷氨酸脱氢酶75

4·2·12　二氢硫辛酸脱氢酶75

4·2·13　前列腺素脱氢酶76

4·3　NADP依赖性脱氢酶79

4·3·1　异柠檬酸脱氢酶79

4·3·2　L-己糖酸脱氢酶80

4·3·4　戊糖磷酸途径的氧化还原酶的检测81

4·3·3　木糖醇脱氢酶81

4.4　与类固醇代谢有关的氧化还原酶86

一、类固醇3β-醇脱氢酶87

二、类固醇3β-醇脱氢酶和异构酶87

三、电子显微镜组织化学88

四、3α-羟类固醇脱氢酶89

五、11α-及11β-羟基类固醇脱氢酶89

六、17β-羟基类固醇脱氢酶90

七、20α-羟基类固醇脱氢酶90

九、各种羟基类固醇脱氢酶91

八、20β-羟基类固醇脱氢酶91

4·5　丙酮酸氧化酶95

4·6　L-古洛糖酸内酯氧化酶97

4·7　尿酸氧化酶98

4·8　黄嘌呤氧化酶99

4·9　葡萄糖氧化酶101

4·10　单胺氧化酶102

4·11　酪氨酸羟化酶和多巴胺β-羟化酶107

一、酪氨酸羟化酶（TH）107

二、多巴胺-β-羟化酶（DBH）107

三、免疫组织细胞化学的原理107

四、酪氨酸羟化酶及多巴胺β-羟化酶的免疫荧光法所见108

4·12　细胞色素氧化酶112

4·13　过氧化氢酶118

4·14　过氧化物酶125

4·15　氧化还原酶的电子显微镜的细胞化学132

一、亚铁氰化铜法132

二、四唑盐法135

第5章 转移酶139

5·1　氨甲酰基转移酶139

5·1·1　鸟氨酸氨甲酰基转移酶（OCT）140

5·1·2　天门冬氨酸氨甲酰基转移酶（ACT）142

5·2　酰基转移酶143

5·3　谷氨酰基转移酶147

5·3·1　γ-谷氨酰基转肽酶147

5·4　糖基转移酶150

5·4·1　糖原磷酸化酶150

5·4·2　分枝糖基转移酶（分枝酶）156

5·4·3　UDP葡萄糖-糖原葡萄糖基转移酶（糖原合成酶）158

5·4·4　糖原磷酸化酶及分枝糖基转移酶的电镜组织化学161

5·5·1　天门冬氨酸氨基转移酶168

5·5　氨基转移酶168

5·5·2　鸟氨酸氨基转移酶170

5·5·3　γ-氨基丁酸氨基转移酶171

5·6　核苷酸转移酶172

5·6·1　尿嘧啶核苷酰基转移酶172

第6章 核酸水解酶（用薄膜底物法检出）175

6·1　方法175

一、明胶底物薄膜的制作法175

二、组织的冰冻切片176

三、组织切片与明胶底物薄膜的反应176

四、底物薄膜和组织切片的染色176

二、染料的选择177

三、底物的选择177

四、对照实验177

一、明胶的选择177

6·2　实验操作上的注意事项177

五、酶活性的分布及酶活性的判断177

6·3　实验结果178

第7章 水解酶180

7·1　酯酶180

一、酯酶的定义和分类180

二、酯酶的鉴别182

7·1·1　非特异性酯酶184

7·1·2　脂酶193

7·1·3　磷脂酶197

一、磷脂酶A〔磷脂酰（基）（水解）酶〕198

二、磷脂酶B〔溶血卵磷脂酰（基）（水解）酶〕199

7·1·4　乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶204

7·2　磷酸酶210

磷酸酶的分类210

7·2·1　硷性磷酸酶212

一、硷性磷酸酶的性质212

三、硷性磷酸酶活性的组织化学检查法213

二、硷性磷酸酶的生物学意义213

四、硷性磷酸酶活性的组织内分布217

7·2·2　对硝基酚磷酸酯酶222

一、非特异性硷性磷酸酶223

二、（特异性硷性）对硝基酚磷酸磷酸水解酶223

三、K+依赖性对硝基酚磷酸酶224

四、非特异性酸性磷酸酶226

五、酸性对硝基酚磷酸酶226

六、其他226

7·2·3　酸性磷酸酶228

一、溶酶体性酸性磷酸酶228

（一）溶酶体性酸性磷酸酶的性质228

（二）溶酶体性酸性磷酸酶的生理学意义228

（三）溶酶体性酸性磷酸酶活性的组织化学检查法228

二、非溶酶体性酸性磷酸酶231

（四）酸性磷酸酶（溶酶体性）活性的定位231

（一）酸性对硝基酚磷酸酶232

（二）酸性磷酰胆硷磷酸酶232

（三）把β-甘油磷酸作为底物的非溶酶体性酸性磷酸酶232

7·2·4　5′-核苷酸酶236

7·2·5　葡萄糖6-磷酸酶240

7·2·6　葡萄糖1-磷酸酶242

7·2·7　磷酸二酯酶243

7·2·8　3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶244

7.3　焦磷酸酶（三磷酸酶与多磷酸酶）246

7·3·1　无机焦磷酸酶246

7·3·2　硫胺素单磷酸酶250

7·3·3　硫胺素焦磷酸酶250

7·3·4　硫胺素三磷酸酶255

7·3·5　核苷二磷酸酶255

7·3·7　腺苷三磷酸酶259

7·3·6　核苷三磷酸酶259

7·3·8　多聚磷酸酶266

7·4　磷酰胺酶267

7·5　硫酸酯酶267

7·6　腺苷酸环化酶和鸟苷酸环化酶273

7·7　外糖苷酶以及其他酶281

7·7·1　α-葡糖苷酶281

7·7·2　β-葡糖苷酶282

7·7·3　β-半乳糖苷酶283

7·7·4　β-N-乙酰氨基葡糖苷酶283

7·7·5　β-葡糖苷酸酶284

7·7·6　α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡糖淀粉酶285

7·8　肽酶287

蛋白酶，蛋白水解酶287

7·8·1　氨基肽酶288

7·8·4　类胰蛋白酶（胰蛋白酶样酶）295

7·8·2　氨基酰β-萘酰胺裂解酶295

7·8·3　脂萘酰胺水解酶（酰基转移酶Ⅰ、Ⅱ）295

7·9　谷氨酰胺酶297

7·10　尿素酶299

第8章 裂合酶类300

8·1　醛缩酶300

8·2　苹果酸合成酶302

8·3　柠檬酸合成酶303

8·4　碳酸酐酶303

第9章 异构酶309

9·1　尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖醛酸表异构酶309

9·2　羟脯氨酸-2-表异构酶310

9·3　尿嘧啶核苷二磷酸半乳糖-4-表异构酶310

9·4　磷酸葡萄糖异构酶310

二、底物薄膜法原理311

一、酶消化法的原理311

第10章 酶消化法311

10·1　一般事项311

三、关于以酶消化为原理的方法的探讨312

10·2　检测方法313

一、有关糖类的检测法313

二、有关脂质的检测法315

三、有关蛋白质的检测法317

四、有关蛋白酶的底物薄膜法318

五、有关淀粉酶的底物薄膜法320

六、有关透明质酸酶的底物薄膜法320

一、放射自显影术的原理323

二、用于放射自显影的放射物质和β粒子的性质323

三、放射自显影术的照相作用机制和分辨力323

11·2　放射自显影术的理论323

11·1　放射自显影术的创立及其发展323

第11章 放射自显影术323

11·3　放射自显影的技术324

一、光学显微镜放射自显影的技术（浸渍法）324

二、电子显微镜放射自显影的技术（玻璃切片法）324

11·4　放射自显影术的应用325

一、放射自显影术在两方面的应用325

二、放射自显影术在其它方面的应用326

11·5　放射自显影术的优缺点328

一、所谓四维的医学·生物学328

二、放射自显影术的前景328

第12章 酶的免疫组织化学331

12·1　荧光抗体法331

一、用荧光抗体法证明酶定位的基本问题331

二、荧光染色操作技术333

三、用荧光染色法确定酶的定位337

12·2　酶抗体法343

一、用于标记的酶344

二、用酶标记抗体的方法345

三、标记抗体的精制法353

四、关于酶抗体法中使用的抗体359

五、组织标本的处理365

12·3　铁蛋白标记法377

一、铁蛋白标记法的建立与由来377

二、铁蛋白研究的现状377

三、铁蛋白结合物的制备378

四、阳离子化的铁蛋白（cationizedferritin,CF）382

五、铁蛋白结合物的应用382

六、阳离子化铁蛋白的应用389

12·4　金属标记抗体法393

一、使用金属标记法的理由393

二、金属标记法中的注意事项393

四、使用的标记物394

三、标记金属所必需具备的条件394

五、标记用的金属或其化合物的种类395

六、标记的方法395

七、氯汞二茂络铁（CMF）标记法396

八、羧醛二茂络铁（FCA）标记法398

九、铋标记法399

十、金标记抗体法400

十一、组织的处理402

第13章 同工酶405

一、发现的经过及定义405

二、同工酶的生理学意义407

三、同工酶的研究对于生物学各领域的贡献408

四、同工酶的组织化学检查410

五、同工酶的分离法410

六、同工酶研究二例414

附录　主要的缓冲溶液表420