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第一篇　总则1

第一章　概述1

第一节　防疫检验工作的特点1

一、影响范围1

二、工作规模1

三、紧急程度1

四、病原体的种类1

目录1

五、标本情况2

第二节　防疫检验室的组织和任务2

一、中心检验室2

二、基层检验室3

第三节防疫检验工作守则3

第一节　采集标本的原财4

第二章　标本的采集和运送4

第二节　采集标本的要求5

第三节　标本的采集方法6

一、空气采样6

二、水样7

三、昆虫、动物的采集8

四、患者标本的采集9

五、尸检标本采样10

六、生物战剂沾染物的采样11

第四节　标本的保存和运送原则11

一、标本保存12

二、标本的运送12

第二节 标本的处理13

二、转送13

一、一般方法13

第一节　标本的接收和输送13

一、标本的接收13

第三章　初步检验13

二、节肢动物标本的处理15

第三节　初步检验16

一、初步检验程序16

二、初步检验要点17

三、初步检验结果的判定标准20

第二篇 细菌和毒素的检验22

第四章 细菌的检验22

第一节　鼠疫杆菌22

一、检验程序22

二、分离方法22

三、鉴定方法23

四、判定标准26

五、注意事项26

附：鼠疫抗血清的制备26

第二节　霍乱弧菌27

一、检验程序27

二、分离方法27

三、鉴定方法28

四、判定标准31

五、注意事项31

附：霍乱抗“O”免疫血清的制备32

第三节　炭疽杆菌32

一、检验程序32

五、注意事项 133

二、检验方法33

三、鉴定方法36

四、判定标准40

五、注意事项40

附一：抗炭疽杆菌荚膜血清的制备40

附二：抗炭疽杆菌沉淀素荧光抗体的制备41

附三：青霉素溶液41

附四：消毒用碘液41

附五：10％中性甲醛固定液42

附六：甘油蛋白固定剂42

第四节　兔热杆菌42

一、检验程序42

二、分离方法42

三、鉴定方法43

五、注意事项44

附：兔热杆菌免疫血清的制备44

四、判定标准44

第五节 布氏杆菌45

一、检验程序45

二、分离方法45

三、鉴定方法46

四、判定标准49

五、注意事项50

附一：布氏杆菌病人的血清学诊断50

附二：染料滤纸片的制备方法51

二、分离方法52

附三：布氏杆菌免疫血清的制备52

一、检验程序52

第六节　类鼻疽杆菌52

三、鉴定方法53

四、判定标准55

五、注意事项55

附：类鼻疽杆菌免疫血清的制备55

第七节　沙门氏、志贺氏杆菌55

一、检验程序56

二、检验方法56

三、鉴定方法57

四、判定标准66

一、检验程序67

五、注意事项67

第八节　创伤感染厌氧病原菌67

二、厌氧菌分离方法68

三、梭杆菌属的鉴定71

四、判定标准73

五、注意事项73

第九节　创伤感染需氧病原菌73

金黄色葡萄球菌73

一、检验程序73

绿脓杆菌74

二、分离培养方法74

三、鉴定方法74

三、判定标准75

一、检验程序75

二、分离鉴定75

一、检验程序76

二、分离方法76

第十节　脑膜炎奈瑟氏菌76

三、鉴定方法77

四、判定标准78

五、注意事项78

二、检验方法79

一、检验程序79

第一节　肉毒毒素79

第五章　毒素的检验79

四、注意事项82

三、判定标准82

第二节　葡萄球菌肠毒素83

一、检验程序83

二、检验方法83

三、判定标准85

四、注意事项85

第三篇 螺旋体和真菌的检验86

第六章　螺旋体的检验86

第一节　钩端螺旋体86

二、检验方法87

一、检验程序87

三、鉴定方法90

四、血清学诊断92

五、判定标准95

六、注意事项95

第二节　回归热螺旋体96

一、直接涂片镜检96

二、鸡胚接种法97

三、动物接种法97

第七章　真菌的检验97

第一节　组织胞浆菌97

一、检验程序97

四、判定标准98

三、鉴定方法98

二、分离方法98

五、注意事项99

第二节　球孢子菌99

一、检验程序99

二、分离方法99

三、鉴定方法100

四、判定标准100

五、注意事项101

第四篇　病毒、衣原体及立克次体的检验102

第八章　病毒、衣原体及立克次体检验概述102

二、检验方法105

一、检验程序105

第一节　天花病毒105

第九章　病毒的检验105

三、鉴定方法110

四、判定标准111

五、注意事项112

第二节　虫媒病毒（东马、西马与委马病毒、黄热与登革热病毒、乙型脑炎与森林脑炎病毒）112

一、基本概念112

二、检验程序116

三、检验方法117

四、鉴定方法120

第三节　流行性感冒病毒123

六、注意事项123

五、判定标准123

二、病毒分离124

一、检验程序124

三、鉴定方法126

附：可溶性抗原的制备126

四、快速血清学检验126

五、判定标准127

六、注意事项127

附：霍乱滤液的制备与检定127

第十章　衣原体与立克次体检验129

第一节　鸟疫衣原体129

附：蔗糖、磷酸盐、谷氨酸盐液130

一、检验程序130

二、检验方法130

三、鉴定方法131

附：鸟疫衣原体补体结合抗原制备方法132

四、判定标准133

第二节　立克次体133

一、检验程序134

二、检验方法135

三、鉴定方法138

四、血清学诊断142

五、判定标准145

六、注意事项146

二、复红染色法147

三、革兰氏染色法147

第五篇　技术方法147

一、美蓝染色法147

第十一章 染色液与染色法147

四、姬姆萨染色法148

五、荚膜染色法148

六、乳酸酚棉蓝染色法148

七、马（Macchiavello）氏染色法148

八、吉梅尼茨（Gimenez）染色法149

九、细胞计数用结晶紫溶液149

十、碘液染色法149

二、甲基红（M-R）试验150

一、糖类发酵试验150

第一节　糖类代谢试验150

第十二章　细菌的生物化学试验150

三、伏-泼（V-P）试验151

四、巯基乙酸钠糖发酵培养基151

第二节　蛋白质代谢试验151

一、靛基质试验151

二、硫化氢产生试验152

附：厌氧菌硫化氢产生试验152

三、明胶液化试验153

四、尿素酶试验153

五、霍乱红试验153

七、牛乳凝固试验154

八、苯丙氨酸脱氨试验154

六、果胶液化试验154

九、赖氨酸脱羧试验155

十、赖氨酸脱羧快速实验155

第三节　盐类利用试验156

一、柠檬酸盐利用试验（Simmon氏法）156

二、酒石酸盐利用试验（Jordan和Ha rmon氏法）156

三、粘液酸盐利用试验157

四、藻胶酸盐利用实验157

五、丙二酸钠利用试验157

第四节 呼吸酶类试验158

一、硝酸盐还原试验158

二、厌氧菌硝酸盐还原试验158

三、氰化钾抑制试验158

五、细胞色素氧化酶试验159

四、氧化酶试验159

第一节　基础培养基160

一、牛肉浸液160

二、肉浸液肉汤160

三、牛肉膏肉汤160

第十三章　培养基和保存液的制备160

四、普通琼脂培养基161

五、赫金格尔（Hottinger）氏消化液161

六、赫金格尔（Hottinger）氏培养基161

第二节 鼠疫杆菌的培养基162

二、龙胆紫亚硫酸钠琼脂培养基162

一、1％溶血琼脂培养基162

八、血琼脂培养基162

七、肝浸液162

三、胆碲铜紫培养基163

四、抗血清琼脂培养基163

五、草酸镁琼脂培养基163

第三节　霍乱弧菌的培养基164

一、碱性蛋白胨水164

二、胆碲碱性蛋白胨水164

三、甲酚红甘露糖琼脂培养基164

四、庆大霉素培养基165

第四节　炭疽杆菌的培养基165

一、2％兔血清肉汤165

四、青霉素琼脂（供串珠试验用）166

二、五倍浓缩肉汤166

三、戊烷脒血琼脂培养基166

五、活性炭碳酸氢钠琼脂培养基167

第五节　兔热杆菌的培养基167

一、葡萄糖半胱氨酸血琼脂培养基167

二、先锋霉素培养基168

第六节　布氏杆菌的培养基168

一、改良赫氏琼脂培养基168

二、胰蛋白？琼脂培养基168

三、双相（固体和液体）培养基168

二、4％甘油普通琼脂培养基169

一、4％甘油肉汤169

第七节　类鼻疽杆菌的培养基169

五、抗敌霉素培养基169

四、万古霉素培养基169

三、类鼻疽杆菌选择性培养基170

四、中性红胆盐培养基170

第八节　沙门氏、志贺氏菌属的培养基170

一、革兰氏阴性菌（GN）增菌液170

二、亚硒酸盐煌绿（SBG）增菌液170

三、亚硒酸盐（SF）增菌液171

四、胆汁葡萄糖肉汤171

五、海氏（Hektoen）肠道菌琼脂培养基172

六、伊红、美蓝（EMB）琼脂培养基172

八、三糖铁琼脂培养基173

七、SS琼脂培养基173

九、尿（素）动（力）靛（基质）培养基174

第九节　创伤感染病原菌的培养基174

一、庖肉培养基174

二、葡萄糖血琼脂174

三、乳糖卵黄牛奶培养基175

四、巯基乙酸钠肉汤半固体培养基175

第十节 脑膜炎奈瑟氏菌的培养基175

一、葡萄糖肉汤增菌培养基175

二、巧克力琼脂平板176

三、PV（多万）选择培养基176

四、半固体糖发酵管176

第十一节 葡萄球菌的培养基177

一、葡萄糖血琼脂培养基177

五、糖血清琼脂平板177

六、菌种保存培养基177

二、甘露醇食盐琼脂培养基178

三、蛋黄亚碲酸盐甘氨酸培养基178

四、葡萄球菌产毒培养基178

第十二节　钩端螺旋体的培养基179

一、改良柯少夫（Ko rthof）培养基179

二、切尔斯基（Терский）培养基179

三、含炭双层培养基180

第十三节　真菌的培养基180

一、沙氏（Sabouraud）琼脂培养基180

三、脑心浸液血琼脂培养基181

二、沙氏琼脂选择性培养基181

第十四节　菌（毒）种保存培养基或保存液182

一、卡-布（Cary-Blair）氏半固体保菌培养基182

二、文-腊（Venkatraman-Ramakrishnan）氏霍乱标本保存液182

三、炭疽标本淀粉保存管182

四、20％中性甘油盐水182

五、50％甘油磷酸盐缓冲液183

六、炭末琼脂保存培养基183

第一节 沉淀试验184

二、琼脂扩散试验184

一、环状沉淀试验184

第十四章　血清学试验184

七、病毒保存液184

三、琼脂免疫电泳186

第二节　凝集试验187

一、玻片（定性）凝集试验187

二、试管（定量）凝集试验188

附一：肥达氏试验188

附二：外斐氏试验189

第三节　红细胞凝集和红细胞凝集抑制试验189

一、流行性感冒病毒血凝抑制试验190

二、虫媒病毒血凝抑制试验194

三、注意事项199

附：主要溶液配制方法199

一、试剂和器材200

第四节　反向间接红细胞凝集试验200

二、试验方法201

三、结果判定203

四、注意事项204

附一：免疫球蛋白的提取204

附二：干燥诊断红细胞的制备207

第五节　炭凝集试验208

一、试剂和器材208

二、试验方法209

三、结果判定210

四、注意事项210

第六节　中和试验210

一、一般中和试验方法211

二、微量细胞培养中和试验214

第七节　补体结合试验217

一、试剂配制218

二、操作方法219

三、注意事项223

附一：巴比妥缓冲液的配制224

附二：10％蛋清盐水的配制224

第十五章　荧光抗体技术225

一、概述225

二、荧光抗体的制备226

三、荧光抗体染色法230

四、荧光显微镜的结构与使用233

五、荧光抗体法在生物防疫检验中的应用235

附：蛋白质与荧光素定量标准曲线237

第十六章　动物实验238

一、接种方法238

二、采血方法241

三、实验动物的剖检243

第十七章　鸡胚培养244

一、接种前准备245

二、接种方法246

三、培养和观察248

四、剖检和收获248

二、组织培养盖玻片249

一、培养容器249

第一节　器材准备和溶液配制249

第十八章　组织培养249

三、橡皮塞250

四、主要溶液的配制250

第二节　细胞培养法253

一、鸡胚细胞培养254

二、地鼠肾细胞培养255

三、人胚肾细胞培养255

四、黑拉（HeLa）细胞培养255

第三节　组织细胞保存法256

一、单层细胞短期保存256

二、细胞悬液长期保存256

一、病毒检验组织培养法操作程序257

二、标本接种257

第四节　标本接种与观察257

三、观察指标258

附：粘病毒组织培养红细胞吸附试验258

第五节　病毒空斑技术260

一、虫媒病毒（A组）空斑260

二、空斑中和法（抑制法）261

三、登革热病毒空斑262

附一：空斑法用培养基的制备263

附二：空斑固定液263

第六节　组织培养注意事项263

第十九章　药物敏感试验264

一、抗菌药物敏感性的测定（纸片法）264

二、联合抗菌素的敏感性测定（纸条法）266

第二十章　菌（毒）种保存法268

一、简易保存法268

二、冷冻真空干燥保存法270

附篇272

一、基层检验室药品、器材272

二、常用缓冲液277

三、实验室常用消毒剂280

四、常用元素的原子量281

五、常用指示剂及pH范围281

六、度量衡名称及简写281

七、度量衡的进位制282

八、手册中药品、试剂中英文对照282

九、缩写中英对照287