《表1 各基因引物序列：miR-95与胃癌细胞洛铂敏感性的关系及作用机制研究》

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《miR-95与胃癌细胞洛铂敏感性的关系及作用机制研究》

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用Trizol提取组织及转染后各组细胞总RNA。按照逆转录试剂盒说明书，取2 mg总RNA建立20 mL逆转录反应体系，37℃反应30 min，将总RNA进行逆转录获取cDNA。使用相应靶基因引物及Go Taq?qPCR Master Mix建立20 mL实时荧光定量PCR（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qPCR）反应体系，进行荧光定量PCR检测。PCR反应程序如下:95℃、5 min，然后40个循环反应:94℃、30 s，58℃、30 s，72℃、30 s，于每个循环的第3个步骤（即72℃、30 s）末期收集荧光信号。U6作为micro RNA的内参，GAPDH作为mRNA的内参。检测结果采用2-ΔΔCT方法计算，得到各mRNA表达的相对定量值。miR-95的检测采用Gene Copoia公司的All-in-One miRNA q RT-PCR Detection Kit微小RNA检测试剂盒。基因的引物序列见表1。