《表1 多杀性巴氏杆菌特异引物序列》

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《内蒙古呼伦贝尔地区羊源多杀性巴氏杆菌荚膜血清群分子流行病学调查》

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参考Townsend等[6]研究合成的多杀性巴氏杆菌特异性KMT1基因引物以及A、B、D、E、F群的荚膜血清群特异性基因引物（表1），引物由北京华大基因生物技术服务有限公司合成。将上述1.5步骤提取的基因组DNA作为PCR扩增模板，先用鉴定巴氏杆菌KMT1基因的引物扩增待检样品，然后利用鉴定荚膜血清群capA、capB、capD、capE、capF基因的引物进行双重PCR扩增目标序列。两轮PCR反应体系及条件一样，采用50μL反应体系:上下游引物各2μL，10×PCR Buffer 5μL，dNTP Mixture（2.5 mmol/L）4μL，ddH2O 34.5μL，Taq DNA Polymerase（5 U/μL，含MgCl2）0.5μL，DNA模板2μL。反应条件:95℃5 min预变性；94℃30 s变性，55℃30 s退火，72℃45 s延伸，30个循环；72℃5 min后延伸。