《表2 ELMO1引物序列》

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《ELMO1基因甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值》

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将各组胃液于4℃，1000 g，离心10 min，弃掉沉渣留上清液，将上清液再次于4℃，10000 g，离心20 min，留取沉淀物用于DNA抽提.各组组织样本保存在DNA保护剂中，提取DNA.步骤详见说明书Quick-DNATM Universal Kit（zymo research Catalog Nos.D4068）.DNA纯度分析采用核酸蛋白分析仪，采用凝胶电泳进行质量检测.之后进行DNA亚硫酸盐修饰，针对修饰前后的序列差异用MethPrimer软件设计甲基化与未甲基引物，进行PCR扩增，引物序列（表2）.本研究采用双蒸水作为空白对照.PCR反应采用Zymo TaqTM Pre Mix试剂盒，反应体系为25μL，反应条件为:95℃，预变性5 min，循环体系为94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共进行40个循环，之后72℃延伸10 min，4℃保存.PCR产物经琼脂糖凝胶电泳进行检测.