《表2 经体外培养肠道菌群降解后肝素抗凝活性》

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《口服肝素与小鼠肠道菌群的相互作用》

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为了进一步获得培养菌群降解肝素的分子证据，进一步提取体外培养的肠道菌群基因组（图4 A），利用肝素酶引物对该基因组进行PCR扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测得到扩增后的DNA电泳条带（图4B）。并对DNA进行回收、纯化与测序后，在NCBI中进行序列比对，其中A引物扩增得到的序列与多形拟杆菌Bacteroides thetaiotaomicron7330编码的肝素酶Ⅱ（hep B）相似度达99%（Sequence ID:CP012937.1），G引物扩增得到的序列与解纤维素拟杆菌Bacteroides cellulosilyticus WH2编码的肝素酶Ⅱ（hep B）相似度达97%（Sequence ID:CP012801.1）。肝素酶Ⅱ是以肝素和硫酸乙酰肝素为底物，裂解2-O硫酸化的糖醛酸的典型肝素酶。上述结果进一步证明体外培养的肠道菌群中可能存在产生肝素酶Ⅱ的菌群，从而发挥了降解肝素的作用。此外，为研究肠道菌群降解后的肝素抗凝活性变化，检测了被体外培养的肠道菌群降解后肝素的活化部分凝血活酶时间（APTT）和抗Xa因子活性。结果发现，与原肝素相比，其抗凝活性没有明显下降趋势仍具有抗凝活性（表2），说明培养肠道菌群降解后的肝素仍有抗凝活性，该结果为口服抗凝肝素研制提供了参考。