《表1 泛素连接的特异性抗体》
目前已经开发K48、K63、K11、M1和K11/K48连接泛素链的特异性抗体(表1)和K6连接泛素链的Affimer,并用于研究相应类型泛素链的功能.这些泛素连接特异性抗体已经商业化,在蛋白质印迹、免疫沉淀、免疫荧光显微等方面得到应用,促进了泛素链的深入研究.目前,还不能精确定义非经典泛素链的功能,尤其是胞内丰度低的K6、K27、K29和K33泛素链,所以开发其余连接泛素链(K6、K27、K29和K33泛素链)特异性抗体等亲和工具对于解析非经典泛素链具有重要的意义.但是也应该认识到,开发其余泛素连接特异性抗体可能要比已报道的泛素连接特异性抗体难度更大.因为泛素分子是一个高度保守的小分子质量蛋白质,自然情况下在体内较难产生泛素连接特异性抗体,所以这些特异性抗体的开发主要通过从合成抗体库中使用噬菌体展示技术筛选出某一特异连接泛素链的特异性抗体,然后通过亲和力成熟得到亲和力进一步提高的特异性抗体.已开发出来的K48、K63、K11、M1连接泛素链特异性抗体,不能区分出同型泛素链和异型泛素链,并且有一定的弱交叉反应性.另外,K11/K48连接泛素链双特异性抗体不能明确区分杂合和分支泛素链.已报道的K6连接泛素链特异性的Affimer能以较高亲和力特异性识别K6连接泛素链,但K33连接泛素链特异性的Affimer却对K11连接泛素链有较明显的交叉反应性[58].虽然不同连接泛素链的构象不同,但有些泛素链的构象相似程度较大,导致所开发的抗体和Affimer不可避免具有一定的交叉反应性.对于丰度较低的泛素链,所开发的抗体的灵敏度要足够高,才有可能在正常条件下(如非过表达)检测出相应的泛素连接类型.未来其余连接泛素链的特异性抗体开发应该考虑如何基于抗体结构分析进行亲和力成熟,使用更加合适的筛选条件筛选出更高亲和力和灵敏度的泛素连接特异性抗体.
图表编号 | XD0093318700 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.09.20 |
作者 | 李贞、赵博 |
绘制单位 | 上海交通大学细胞工程和抗体药物教育部工程研究中心上海交通大学药学院、上海交通大学细胞工程和抗体药物教育部工程研究中心上海交通大学药学院 |
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