《表1 PCR引物序列：基于胃肠组织cAMP/PKA信号转导通路变化研究大鼠脾气虚证模型与线粒体损伤模型的相关性》

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《基于胃肠组织cAMP/PKA信号转导通路变化研究大鼠脾气虚证模型与线粒体损伤模型的相关性》

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分别称取大鼠胃窦、空肠组织100 mg，仔细剥离附着肌肉、结缔组织等，Trizol法提取其总RNA，其光密度（D)（260 nm）/D (280 nm）均在1.8～2.2。反转录反应体系：总RNA 4μL，5×PrimeScript Buffer (for real time）2μL，PrimeScript RT Enzyme MixⅠ1μL，RT Primer Mix 1μL，RNase Free dH2O 4μL。反应条件：37℃15 min，85℃5 s。c DNA扩增反应体系。RNase Free dH2O 9.5μL，上、下游引物（序列见表1）各0.5μL，SYBR Premix Ex TaqⅡ12.5μL，c DNA 2μL。反应条件：95℃2 min，95℃30 s，60℃30 s，40个循环。根据NTC反应有无荧光信号检出并结合熔解曲线，确认反应体系是否有污染。标准曲线的相关系数（R2）>0.98，扩增效率（E）应在0.8～1.2范围。采用2-△△Ct法对PKA、PHK、Gp基因表达进行相对定量（p），以β-actin为内参。