《表2 引物序列：TNF-α、CD40基因多态性与乙肝肝硬化的相关性研究》

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《TNF-α、CD40基因多态性与乙肝肝硬化的相关性研究》

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采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）结合测序。（1）PCR扩增:包括308位点的TNF-α、sl883832位点及rs48 10485位点的CD40。聚合酶链反应总体积为20μL，基因组DNA为2μL，下游引物1μL（序列见表2），Taq酶1U，10×PCR缓冲液2μL，25 mmol/L MgCl22μL，25mmol/L dNTPs 2μL，去离子水9.8μL。程序设定:先94℃5min；然后94℃30s，60℃30s，72℃45s循环；72℃10min。在含EB代用品的10g/L琼脂糖凝胶上电泳，用紫外分光度法观察结果。（2）PCR扩增产物在含EB替代物的10g/L琼脂糖凝胶上电泳，用UV灯观察，并与标记物进行酶切比较。（3）PCR产物直接作为酶切底物，反应的步骤和方法参照各内切酶的说明，在30g/L琼脂糖凝胶上电泳2h。