《表1 抗体效价滴度：人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

本研究以纯化的rhNGAL包板，对挑选的单克隆行2次间接ELISA筛选，得到14株高效价阳性杂交瘤细胞株。使用抗体分型检测试剂对细胞上清进行亚类鉴定，最后得到6株杂交瘤细胞株并大量培养及冻存，其中25号为IgG1亚型，8、11、19、23、35号为IgG2a亚型。上清抗体效价最高的2株细胞经小鼠腹腔诱生法制腹水，产物用Protein G柱纯化，得到单抗19、单抗35。以样品孔OD值与阴性对照孔OD值之比大于2.1为判断标准，测得多抗1、多抗2、单抗19、单抗35纯化前后的效价，见表1；BCA法测得纯化后的4只抗体浓度分别为2.11、1.98、2.6和2.03 mg/mL；经SDS-PAGE电泳分析（图4），抗体的纯度皆超过90%，可以满足后续实验要求；等温滴定量热法（isothermal titration calorimetry，ITC）测得NGAL单克隆抗体19、35的亲和常数分别为3.06×109、2.14×109，非竞争ELISA结果为2.62×109、1.72×109，两者基本一致。