《表2 通用引物与延胡索、齿瓣延胡索、夏天无AS-PCR扩增引物》

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《位点特异性PCR鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无药材》

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对紫堇属实心延胡索组、叠生延胡索组14个物种共56个样品的mat K，trn G，trn H-psb A和rbc L序列分别进行分析，结果显示rbc L序列不存在SNP位点，mat K，trn G，trn H-psb A存在SNP位点。mat K序列第493位碱基G和第746位碱基G，和trn H-psb A序列第280位碱基C为延胡索的特异性SNP位点；trn G序列第229位碱基G和第541位碱基A为齿瓣延胡索的特异性SNP位点；mat K序列第188位碱基C和第692位碱基G为夏天无的特异性SNP位点。利用以上SNP位点，设计延胡索双阻滞和单阻滞位点特异性PCR扩增引物Y1和Y2，齿瓣延胡索与夏天无双阻滞位点特异性PCR扩增引物分别是T1和D1（表2）。设置正、反向引物的3'端与SNP位点完全匹配，并将3'端的倒数第2或3位引入错配碱基。如表2所示，斜体的碱基为引入的错配碱基，仅加粗的碱基为SNP位点。利用设计的引物对延胡索、齿瓣延胡索和夏天无进行AS-PCR扩增，分别得到260，297 bp；353 bp；544 bp的条带。