《附表HOXA10-mRNA和亚硫酸氢盐修饰后HOXA10启动子测序的引物》

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《腹腔镜子宫腺肌瘤切除术后辅助治疗对种植期内膜HOXA10及其基因启动子甲基化的影响》


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亚硫酸氢盐修饰后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)引物见附表。由上海生工生物工程设计与合成:检测HOXA10基因启动子3个片段中F1的甲基化产物,片段大小均为261 bp,共确定有19个CpG位点,观察组共检测1 463个CpG位点。BSP检测体系(50.0μl) :Buffer 5.0μl,dNTP 4.0μl,Taq 0.5μl,上游引物1.0μl,下游引物1.0μl,模板8.0μl,ddH2O30.5μl,反应条件:94℃5 min,95℃30 s,55℃30 s,72℃30 s,40个循环;72℃10 min,4℃保存。每个样本的PCR产物克隆至pMD19-T-simple载体(参见Takara说明书),送北京阅微基因技术有限公司测序。