《表1 定量PCR引物序列》

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《钙调蛋白小亚基Capn4对依托铂甙诱导的鼻咽癌细胞CNE2 DNA损伤修复NHEJ通路相关蛋白的作用》

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取对数生长期的CNE2Capn4（-）和CNE2Vector细胞，计数，调整细胞最终浓度为5×105个/ml，2 ml/皿，接种到6 cm的培养皿中。收集细胞，用PBS洗涤细胞两次，2 000 r/min，离心5 min，弃上清，加入1ml BIOZOL试剂，用移液器反复吹打裂解细胞。将样品在室温下孵育15 min，加入200μl氯仿，盖紧管盖，振荡混匀并将其在冰上孵育15 min。于4℃12 000 r/min离心15 min，RNA存在于上清层中，加入等体积冰浴的异丙醇，颠倒振荡混匀，将混合的样品在-20℃孵育20 min。4℃，12 000 r/min离心10min，弃上清，加入1 ml冰浴的75%乙醇，颠倒洗涤离心管管壁，并旋涡振荡样品。4℃，12 000 r/min离心5 min，去上清，在阴凉处晾干沉淀。加入50μl无RNA酶水溶解RNA沉淀。使用NanDrop 2000超微量分光光度计检测样品RNA的浓度和纯度。配制RT反应液。逆转录反应条件为:室温10 min，42-60℃45 min，95℃5 min，冰浴5 min。使用Biorad My Cycler Thermal Cycler基因扩增仪进行逆转录反应。合成的cDNA立即做PCR扩增或保存于-70℃。在冰上配制PCR反应液。充分混匀反应液，分装至各个PCR反应管中。将加好模板的PCR反应管进行短暂离心。RT-PCR反应程序设置为:94℃2 min，94℃10 s，60℃15 s，72℃30 s，40个循环，荧光信号采集在72℃。