《表1 2D-DIGE实验设计》

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《米氏凯伦藻细胞表面膜蛋白质组及其对温度变化的响应研究》

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将收集的藻细胞用1mL磷酸盐缓冲溶液PBS（0.02mol/L phosphate，0.45mol/L NaCl，pH 7.5）洗涤，加入Hank’s平衡缓冲溶液HBSS（5.33mmol/L KCl，413.79mmol/L NaCl，1.26mmol/L CaCl2，4.17mmol/L NaHCO3，0.407mmol/L MgSO4，0.493mmol/L MgCl2，0.338mmol/L Na2HPO4，5.56mmol/L D-Glucose，0.441mmol/L KH2PO4）后于4°C，800g离心5min，沉淀重悬于200μL HBSS（含1mol/L urea，pH 8.5）缓冲溶液中，加入600pmol的cy5染料（温度实验标记方案如表1所示），于4°C暗处孵育20min进行标记处理。反应完后加入20μL 10mmol/L的lysine，4°C暗处反应10min后4°C，800g离心去上清液。用500μL HBSS（pH 7.4，盐度30）的缓冲液洗涤2次，4°C，800g离心5min去上清液后–80°C保存。