《表2 TCDCA对FLS细胞中VCAM-1mRNA表达量》
注:RU486(米非司酮)为GR的特异性抑制剂
采用q-PCR方法检测。分组试验设计见表2。具体操作步骤如下:待第4代的FLS细胞长满贴壁后,按照5×105 cell/mL加入到6孔板中过夜培养,待细胞的融合度达到90%左右,进行试验。按照Axygen总RNA试剂盒说明书进行RNA的提取,并按照VazymeHiscript?Q RT SuperMix说明书来反转录得到30μL体系的cDNA。FLS细胞中VCAM-1 mRNA表达量用FastStart Universal STBR Green Master(Rox)检测,按照试剂盒说明书配置20μL q-PCR反应体系:模板2μL,上、下游引物各0.8μL,SYBR染料6.4μL,用去离子水补至20μL。用2-ΔCt[ΔCt=Ct(VCAM-1)-Ct(β-actin)]公式计算VCAM-1基因的相对表达量。反应过程采用40个循环,退火温度为58℃。试验中引物序列如下,其中β-actin上游:5′-cccatctatgagggttacgc-3′;下游:5′-tttaatgtcacgcacgatttc-3′。VCAM-1上游:5′-ggctcgcagttgcgaagttta-3′;下游:5′-caatggcgggtattaccaagga-3′。
图表编号 | XD0063863100 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.02.01 |
作者 | 宝力格、周蕾、何秀玲、关红、钱英红、李培锋 |
绘制单位 | 内蒙古农业大学兽医学院、农业部动物临床诊疗技术重点实验室、内蒙古农业大学兽医学院、农业部动物临床诊疗技术重点实验室、内蒙古农业大学兽医学院、农业部动物临床诊疗技术重点实验室、内蒙古农业大学兽医学院、农业部动物临床诊疗技术重点实验室、内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大学兽医学院、农业部动物临床诊疗技术重点实验室 |
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