《表1 Csa-miR171a、Csa-miR171b、Csa-miR171c、Csa-miR171d克隆引物列表》

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《黄瓜microRNA171的克隆与功能分析》

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根据前期‘北京截头’叶片非编码小RNAs测序结果，筛选获得4个高表达、高质量的Csa-miR171成熟序列和前体序列，将筛选到的Csa-miR171前体序列比对到黄瓜基因组数据库（http://cucurbitgenomics.org/），获得具有高效表达的Csa-miR171前体侧翼序列（Csa-miR171前体序列上、下游各延伸100～150 bp），采用primer 6软件进行引物设计（表1），以黄瓜DNA为模板进行PCR扩增，得到Csa-miR171a、Csa-miR171b、Csa-miR171c、Csa-miR171d完整的4个前体序列。将Csa-miR171前体的PCR产物与pMD19-T载体连接，转DH5α感受态细胞，采用氨苄青霉素（AMP）抗性筛选阳性菌落，PCR鉴定阳性克隆送至公司（南京擎科生物科技有限公司）测序鉴定。