《表1.基于快速停留-荧光能量共振转移检测技术分析Ana.Pif1解旋反应的DNA底物》

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《嗜热细菌Anaerobaculum hydrogeniforman Pif1解旋酶的异源表达与解旋反应特性》

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F，Fluorescein；HF，Hexachlorofluorescein.

将构建成功的pET21a-Ana.Pif1-TEV/SUMO重组质粒转化到大肠杆菌的表达菌株E.coliBL21（DE3）中；当OD=0.6时，在1 L的LB培养基中加入1 mol/L的IPTG为400μL（即诱导时IPTG工作浓度为0.4 mmol/L），进而在低温（22°C）下诱导14 h表达重组蛋白。按照改进的文献[19]方法进行分离纯化:第一次Ni-NTA纯化后使用TEV酶4°C酶切6 h，随后再进行第二次Ni-NTA纯化以去除C-端的SUMO与His标签序列；并在最后纯化步骤中增加Supdex 200凝胶过滤层析。纯化产物由10%（W/V）SDS-PAGE分析，并使用Quantity one分析软件计算出蛋白条带的纯度；由BCA法测定蛋白浓度。加甘油（终浓度25%）后超滤浓缩，–80°C冻存备用。