《表1 基因扩增和鉴定引物》

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《携带CD自杀基因NDV重组病毒对小鼠肝癌细胞转移模型的治疗效果》

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注：CD (F-R）为扩增CD基因片段引物。NP/P (F1-R1）和NP/P (F2-R2）为重组病毒鉴定用引物，Primer 3为反转录扩增引物。其中，酶切位点用双下划线表示；Kozak序列用字符框表示；单下划线分别为GE和GS序列。

利用PCR方法分别将AscⅠ、SfiⅠ引入CD基因3'端和5'端，引物序列见表1 (CD-F/R）。将其克隆至pMD18-T载体上，构建重组质粒pMD-CD。将本实验室保存NP基因和P基因间非编码区含限制性酶切位点AscⅠ、SfiⅠ序列pBrClone30质粒与pBrAnhinga质粒分别用AscⅠ、SfiⅠ酶切后，将测序正确CD基因片段分别插入pBrClone30质粒与pBrAnhinga质粒NP基因和P基因之间，获得重组质粒p BrClone30-CD和pBrAnhinga-CD。