《表2 12对SSR引物信息》

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《利用荧光标记SSR鉴别21个茶花新品种》

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F:正向引物；R:反向引物F:Forward primer；R:Reverse primer

SSR引物的获得方式有2种，3对从前人的研究中获得（Kaundun and Matusmoto，2002；Freeman，2004；刘振等，2008）；9对从本实验室所用的杜鹃红山茶（Camellia azalea Wei）的转录组数据中开发获得（表2）。从每个杂交组合中各挑取1个杂交新品种进行引物筛选实验。初步挑选出60对引物，由上海桑尼生物科技有限公司合成；并用1%的琼脂糖凝胶电泳和8%的聚丙烯酰氨凝胶电泳进行筛选。PCR反应体系10μL，包括6.15μL 3dH2O、1.0μL 10×PCR Buffer（Mg2+free）、0.8μL Mg2+（25 mmol·L–1）、0.6μL dNTP（2.5 mmol·L–1）、正向和反向引物各0.4μL、0.15μL Taq酶（5 U·μL–1）和0.5μL DNA模板。PCR反应程序为:94°C预变性3分钟；94°C变性30秒，各引物退火温度退火30秒，72°C延伸1分钟，30个循环；72°C延伸10分钟，4°C保存。先用1%的琼脂糖凝胶电泳检测各引物的扩增效率，然后用8%的聚丙烯酰氨凝胶电泳检测PCR产物多态性。各引物对扩增产物的上样量为1.5μL，分子量标准为50 bp DNA Ladder，180 V电压下电泳2小时，0.1%AgNO3染色15分钟，NaOH显色，拍照保存以备分析。将挑出的60对引物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选，获得12对条带清晰、多态性和稳定性高的引物，用于后续荧光毛细管电泳（表2）。