《表4 SSR-PCR反应正交试验设计L9 (23)》

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《短丝木犀SSR-PCR反应体系优化及基于DNA混合池的引物快速筛选》

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各种因素对不同物种和不同分子标记方法的PCR反应影响作用不同（徐明怡等，2016；杨旭等，2016）。以短丝木犀叶片DNA为模板，采用L9（23）正交试验方法（表4），在25μL体系下共进行9个处理，针对引物浓度和DNA浓度这两个因素进行了3个水平的优化。2×Taq PCR Master Mix的使用量按本实验室直接套用。引物选用OSM01，SSR-PCR扩增在PCR自动系列化分析仪上进行。反应程序为:（1）94℃预变性5 min；（2）94℃变性4 s；（3）55℃退火30 s；（4）72℃延伸30 s；（5）重复（2）～（4）进行30个循环；（6）72℃延伸5 min；（7）4℃保存。用1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增后的产物。