《表1 引物序列:逍遥散对慢性不可预知温和应激大鼠下丘脑弓状核JAK/STAT通路变化的影响》

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《逍遥散对慢性不可预知温和应激大鼠下丘脑弓状核JAK/STAT通路变化的影响》


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PCR检测大鼠下丘脑弓状核ob-R,JAK2,STAT3 m RNA表达大鼠ARC低温下转移至无菌无RNA酶离心管中,称量净质量,加入RNA-Solv Reagent 10μL,匀浆,按试剂盒说明书操作步骤提取总RNA;根据反转录试剂盒说明建立20μL反转录体系,于PCR仪上42℃50 min,95℃5 min,逆转录合成c DNA;以c DNA为模板,按照Real-time PCR试剂盒说明书进行PCR扩增,建立50μL PCR反应体系,PCR反应采用两步法,设45个循环(95℃预变性10 min,95℃变性15 s,60℃退火1 min),每个循环后退火阶段进行信号检测,根据RQ=2-ΔΔCt计算分析,以正常组1号大鼠RQ值设置为1,甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,计算m RNA相对表达量。引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列见表1。