《表3 不同耗材处理方法提取水稻种子总RNA的检测结果》

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《水稻种子总RNA提取质量问题的探究》

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电泳检测结果表明，耗材高温灭菌后烘干1次用于提取水稻种子总RNA效果最差，28S和18S条带弥散严重，RNA降解严重（图5A），生物分析仪结果显示RIN值较低，5S峰值较高，并且附带杂峰（图6A），无法得到高质量的RNA进行后续实验。耗材高温灭菌2次，50℃烘干5天提取的种子总RNA电泳结果中28S和18S条带清晰可见，却伴有明显弥散拖尾现象（图5B），生物分析结果显示RIN值为6.1（表3)，5S峰值偏高，且带有杂峰（图6B），说明总RNA完整性不好，RNA出现明显降解，虽然比高温灭菌1次的效果稍好，能满足后续的反转录和RT-PCR实验要求，但进行转录建库风险较大。耗材经蛋白酶K处理后高温灭菌两次，50℃烘干用于提取的水稻种子总RNA能看到完整的、无明显降解的28S和18S条带，5S条带较为暗淡（图5C），生物信息仪分析结果（图6C）显示清晰可见的28S峰和18S峰，5S峰值较小，RIN值为7以上，完整性好，与琼脂糖电泳结果一致。综合而言，以上耗材几种处理方法中，用蛋白酶K处理耗材能够有效地抑制RNase对RNA的降解，并提取到质量高、完整性好的水稻种子总RNA，符合后续相关实验的要求。