《表1 RNA浓度和纯度检测结果》

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《意大利蜜蜂大龄幼虫总RNA提取方法优化》

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利用紫外分光光度计检测总RNA的浓度和纯度，并用琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性。结果显示使用Trizol试剂说明书方法所提取两个样品的浓度在1 000 ng/ul左右（详见表1），浓度较高，但其A260/A280的比值却在1.52以下，说明所提的总RNA存在蛋白质和DNA的污染，且从电泳的结果来看，原说明书方法提取的总RNA，rRNA的5S条带较亮说明总RNA降解严重，而且提取的两个样品在胶孔处存在条带属基因组DNA的污染（详见图2-A），因此直接采用Trizols试剂说明书上的方法提取的意大利蜜蜂大龄蜂王幼虫的总RNA达不到cDNA文库构建的要求。优化后的方法提取的意大利蜜蜂总RNA，rRNA的18S、28S条带清晰，5S条带亮度较弱，说明总RNA降解的量较少（详见图2-B）且浓度和纯度检测结果（详见表1）显示用该方法所提两个样品的RNA浓度都在1 600 ng/ul以上，A260/A280比值在1.70～1.80之间，说明RNA纯度较高，基本符合构建文库的要求。