《表4 正交试验不同处理提取细叶桉叶片RNA的纯度和浓度的方差分析》
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《基于Kingfisher Flex系统树木叶片RNA的提取方法比较及优化》
注:***:p≤0.001;**:p≤0.01;*:p≤0.05
对9个试验号提取的RNA的纯度和浓度的结果进行方差分析(表4),各处理间对提取的RNA浓度和纯度均有极显著影响(p<0.001)。因此需要对各试验处理间进行平均值的多重比较(数据未列示),寻求最优程序组合。其中,提取RNA浓度最高的最优水平组合为T3组合(RNA浓度为512.1 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为1.66,OD260/OD230比值为1.11),提取RNA纯度最好的最优水平组合为T5组合(RNA浓度为88.97 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为1.99OD260/OD230比值为2.02)。由于提取的RNA需要满足下游实验如Northern杂交、cDNA文库构建、实时定量PCR等分子生物学研究,对RNA的质量和纯度要求较高。因此,综合分析比较得到提取桉树叶片RNA的最优程序组合为T5(表5)(洗涤速度medium,洗脱速度medium,洗涤时间3 min,洗脱时间3 min)。T5程序(RNA浓度为88.97 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为1.99、OD260/OD230比值为2.02)与试剂盒C默认程序(RNA浓度为296.97 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为2.01,OD260/OD230比值为2.00)提取RNA的结果相比较,二者在提取RNA的纯度上较为一致,都能满足高纯度RNA的纯度要求,但T5程序下提取RNA的浓度较低,试剂C默认程序下提取RNA的浓度为T5程序下提取RNA的浓度的三倍左右。因此,综合分析后筛选出试剂盒C的默认程序为桉树叶片RNA提取的最优程序。
图表编号 | XD00152881100 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.05.14 |
作者 | 何佳悦、王莉、贾翠蓉、朱显亮、王亚琴、翁启杰、周长品、甘四明、李发根 |
绘制单位 | 中国林业科学研究院林木遗传育种国家重点实验室、中国林业科学研究院热带林业研究所热带林业研究国家林业局重点实验室、中国林业科学研究院热带林业研究所热带林业研究国家林业局重点实验室、中国林业科学研究院热带林业研究所热带林业研究国家林业局重点实验室、中国林业科学研究院热带林业研究所热带林业研究国家林业局重点实验室、中国林业科学研究院热带林业研究所热带林业研究国家林业局重点实验室、中国林业科学研究院热带林业研究所热带林业研究国家林业局重点实验室、中国林业科学研究院林木遗传育种国家重点实验室、中国林业科学研究院热带 |
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