《表1 优化前实验结果：硬脂酰辅酶A去饱和酶1在骨肉瘤组织的表达及其对细胞增殖侵袭的影响》

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《硬脂酰辅酶A去饱和酶1在骨肉瘤组织的表达及其对细胞增殖侵袭的影响》

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将临床组织从液氮中取出，低温并去RNA合酶的条件下剪碎、研磨组织；收集1×106左右对数生长期细胞，消化离心后去上清液，PBS盐溶液洗细胞3次，去上清。将处理好的组织或细胞置于新准备的离心管中，加入1 m L Trizol，置于冰上裂解5 min，严格按说明书进行RNA抽提，50μL无核酶水稀释RNA沉淀。Nano Drop2000超微量分光光度计检测RNA浓度，取1μg严格按说明书进行逆转录，以得到的c DNA产物作为模板，行Cyber Green荧光实时定量PCR反应体系检测基因表达水平。反应条件：预变性94℃4 min，扩增条件94℃30 s，60℃1 min，40个循环。引物序列见表1。计算组织或细胞中SCD1相对于内参基因β-actin的△△CT值，进而换算成的相对表达量为SCD1的m RNA表达量。