《表1 引物序列:芥菜型油菜BjuB.KAN4基因调控类黄酮的途径》

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《芥菜型油菜BjuB.KAN4基因调控类黄酮的途径》


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根据NCBI(NW008726050;NC027749;NC027761;NC027760;NC027768)和BRAD(http://brassicadb.org/brad)公布的芸薹属KAN4基因CDS和DNA序列,使用Primer 5.0软件设计引物(表1)。分别以PM的cDNA和DNA为模板,利用基因特异性引物进行PCR扩增,扩增条件为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,58℃退火45 s,72℃延伸90 s,34个循环;72℃延伸5 min。经电泳和胶回收连接目的载体后转化大肠杆菌DH5α,将转化子进行菌液PCR鉴定,选取阳性菌液送北京博迈德生物科技有限公司测序。