《表1 拮抗菌QHZ11的引物筛选》

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《马铃薯立枯丝核菌拮抗菌QHZ11的实时荧光定量PCR快速检测与应用》


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根据GenBank中类芽孢杆菌及其近源菌株的gyrB基因序列,遵循荧光定量PCR引物设计原则,利用Primer 5.0设计3对gyrB基因特异性引物(表1),由金唯智生物科技有限公司合成。用合成引物对供试的其他菌株DNA进行普通PCR扩增。PCR反应体系(50μL):Taq DNA聚合酶(5 U/μL)25μL,上、下游引物(10 mmol/L)各2μL,DNA模板(10 mmol/L) 2μL,ddH2O 19μL。PCR反应条件:94°C 5 min;94°C 30 s,60°C 30 s,72°C 30 s,35个循环;72°C 5 min。PCR扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行引物特异性验证。