《表2 繁殖轴相关基因引物信息》

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《β-胡萝卜素对肉用母牛卵泡发育和繁殖轴相关基因表达的影响》

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用TRIZOL提取牛下丘脑、垂体以及卵巢组织中的m RNA，超微量紫外可见分光光度计（Nanohotometer TM Peal，Implen，德国）测m RNA浓度，将m RNA浓度调整至500～1 200 pg/μL。通过Prime Scrit PTM RT Reaent Kit反转录试剂盒进行反转录，获得下丘脑、垂体以及卵巢细胞c DNA。参考NCBI数据库中已公布普通牛（Bos taurus）的Kiss1、GPR54、Gn RHR、EGR1、Ca MKII、ERK1/2、JNK、p38、LHβ、FSHβ和ERα以及GAPDH序列，通过Premier 5.0软件设计引物，具体引物信息见表2。应用荧光定量PCR仪（Light Cycler 480，Roche Applied Science，德国）进行SYBR实时荧光定量检测。荧光定量采用SYBR Premix Ex Taq TM II试剂盒。反应体系：SYBR Premix Ex Taq TM II 7.5μL，模板1μL，上、下游引物各0.5μL，dd H2O5.5μL；反应条件：95℃，预变性5 min；95℃变性10 s；退火45 s，72℃延伸35 s，循环35次。每个样本进行3次重复，用2-△△Ct法对结果进行统计分析。测定基因引物见表2。