《表1 各目标引物序列和大小》

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《肝癌患者组织中Cyclin E、p27kip1和Ki-67蛋白的表达与临床特征的相关性》

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各组样本组织经超声充分研碎，加入Trizol试剂一步法提取细胞总RNA（根据试剂盒提示步骤进行），测量其浓度和纯度；逆转录试剂盒合成c DNA，设计目标引物序列（见表1）。反应体系包括c DNA5μl+正反向引物各0.5μl+Taq聚合酶0.5μl，添加无菌反应水至总反应体系为25μl。反应条件为95℃5 min，95℃20 s，60℃60 s，40℃20 s，共45个循环，95℃15 s、60℃60 s，熔解曲线，95℃15 s结束。结果以目标引物与内参引物条带灰度比值表示。