《表2 乌头生品和炮制品DNA提取的12种方法方案设计》

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《应用DNA提取改良和二次聚合酶链反应技术检测乌头及其炮制品》


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(1)将9种乌头根茎生品或炮制品研磨成细粉,取20 mg左右样品进行提取。(2)加入表2中1~12的提取缓冲液1 mL,添加(+)或不添加(-)聚乙烯吡咯烷酮(PVP40)至终浓度1%,65℃水浴1 h或3 h。(3)以12 000×g离心5 min,取上清液,加入等体积氯仿∶异戊醇(24∶1)重复4次,以8 000×g离心10 min。(4)取上清液,加入等体积异丙醇或5倍体积无水乙醇+1倍体积2 mol/L NH4Ac,颠倒混匀。(5)于4℃或-20℃过夜沉降反应。(6)以13 000×g离心15 min。(7)沉淀干燥后加入100μL ddH2O溶解备用。