《表1 乳酸脱氢酶测定反应液加样量(μL)》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《体外外翻肠囊法评价不同药物的渗透性》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

LDH存在于人体各组织器官中，是机体能量代谢中的一种重要酶。当机体各组织器官受到急性损伤时，受损细胞会释放出LDH[3]。通过测定介质中游离LDH的水平，可以反映出离体肠段的活性。将SD大鼠实验前禁食过夜（自由饮水），用7%水合氯醛麻醉后固定，沿腹中线剪开腹腔，自胃幽门下端2 cm为起点，剪取约10 cm作为十二指肠、自胃幽门下端15 cm为起点剪取约10 cm作为空肠、自盲肠上端15 cm为起点剪取约10 cm作为回肠[4]。置4℃的K-R营养液中，用空白K-R液冲洗肠道，洗去内容物并剥离残留的肠系膜和脂肪组织。用圆头玻璃棒（直径约3 mm）将肠段翻转，使其黏膜面朝外，浆膜面朝内，注意避免过度拉伸肠段。将肠段一端结扎后，在肠腔内注入一定量的K-R空白溶液，将另一端套入5 mm外径硅胶管。垂直将肠段置40 m L K-R营养液中，于37℃下恒温通入95%O2及5%CO2。分别于15、30、45、60、90 min时从黏膜侧收集0.2m L液体，同时补加同体积37℃空白K-R营养液，样品于-20℃保存。取点完成后，测定肠段的宽度和长度，并由此计算肠段的膜面积。将收集的样品解冻，于6×103r·min-1离心，取20μL上清液，按表1加样量测定酶含量。首先加入纯化水、标准液、待测样本、基质缓冲液和辅酶Ⅰ，混匀，于37℃下温育15 min；再加入2，4-二硝基苯肼，混匀，于37℃下温育15 min；最后加入0.4 mol·L-1Na OH溶液，混匀，于室温下放置5min，用酶标仪测定450 nm的吸光度。酶活力计算公式为:LDH活性（U·L-1·cm-2）=（OD测定-OD对照）/（OD标准-OD空白）×标准品浓度×1000/膜面积。由图2可见:各肠段中的游离LDH均随着时间的延长而增加，表明各肠段在离体状态下活性逐渐降低。参照文献中LDH的活性数值，90 min内，模型中LDH的活性均较低，说明所构建的体外外翻肠囊模型可以较好地保持肠段的活性[5]。