《表3 白蛋白与华法令钠结合的HPLC出峰积分表》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《一步离子交换层析从Cohn组分Ⅴ上清液中分离人血清白蛋白》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

对于从乙醇-水溶液中分离蛋白质来说，一个重要问题是分离纯化的蛋白质是否还有原来的生物学活性。乙醇虽然具有很好的亲水性，但也是一种有机溶剂，而有机溶剂的存在则有可能影响蛋白质的结构。为解决这一问题，本工作用圆二色光谱和荧光光谱表征了分离产物的光学特性，并与商品人血清白蛋白进行比较，表明了两者的一致性，证明这个分离过程没有引起HSA结构的变化。这是因为乙醇用于血浆蛋白质的沉淀分离已经有几十年的历史，人血清白蛋白只有一条肽链，分子间有17对二硫键，是一个结构紧凑不易变性的蛋白质。但在层析条件下是否发生变性，还需要实验证明。为此，本研究不仅测量了蛋白质的二级和三级结构，还进行了白蛋白与药物结合活性的测量。人血清白蛋白含两个主要的药物结合位点[21]，分别位于IIA和IIIA域的洞穴内。药物结合位点I是一个正电荷残基包围的口袋，口袋内壁由疏水氨基酸构成（Lys-199，Arg-218，His-242）[21，22]。华法令钠是结合位点I的特征药物。鉴于白蛋白在313nm几乎无吸收，而华法令钠在313 nm有最大吸收[16]。通过分析白蛋白与华法令钠在313 nm波长下的色谱峰图，从而确定白蛋白与小分子药物结合率（图6）。人血清白蛋白的结合功能与其空间构象有很大关系，通过对HPLC峰面积积分处理，结果显示从组分V上清中纯化的人血清白蛋白（4.17%）与人血清白蛋白制品（4.67%）对小分子的结合率基本一致（表3）。