《表1 LAMP反应所需的引物信息》

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《可视化和实时荧光环介导恒温扩增技术快速检测原料乳中的沙门氏菌》

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选用已报道的沙门氏菌特异性基因inv A[19]为检测靶基因，并根据NCBI数据库中公布的inv A（登录号为U43238.1）基因序列，通过在线软件Primer Explorer V5 （http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html）设计得到LAMP引物组，该引物组详细信息见表1。合成表1中的引物F3、B3、LF、LB、FIP和BIP，并按照特定浓度比例（F3:B3:LF:LB:FIP:BIP=1:1:4:4:8:8，1代表0.2μmol/L）加入至LAMP反应体系中，预先设置该LAMP反应中涉及的主要反应参数梯度值，逐一进行试验，其反应产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳观察，并根据梯状条带强弱获取各个参数对应的最优值。另外，本研究涉及的V-LAMP方法即向以上反应体系中加入钙黄绿素显色液[20]，在恒温金属浴中反应，通过观察反应产物颜色变化判定结果；RF-LAMP方法即向以上反应体系中加入荧光染料SYBR Green I[21-22]，在荧光定量PCR仪中反应，通过实时观察荧光曲线图判定结果。