《表2 基因扩增引物信息：玉米皮替代玉米粉对湘东黑山羊内脏脂肪组织脂肪代谢的影响》

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《玉米皮替代玉米粉对湘东黑山羊内脏脂肪组织脂肪代谢的影响》

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取1μg总RNA，使用Prime ScriptTMRT reagent Kit with g DNA Eraser反转录试剂盒（Ta Ka Ra公司）进行反转录。该试剂盒含有去除基因组DNA的g DNA Eraser，可有效除去基因组DNA。反转录合成的c DNA置于-80℃下保存备用。根据Gen Bank已公布的山羊基因序列，使用Primer Premier 6.0进行目的基因和β-actin基因（内参基因）扩增引物设计，以Primer BLAST工具在线分析引物特异性。所有引物委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成，具体引物序列及参数见表2。在Lightcycler 480Ⅱ实时荧光定量PCR系统（瑞士Roche公司）中，按照TaKa Ra定量试剂盒TB Green?Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RNase H Plus）说明进行实时荧光定量PCR检测。该定量试剂盒含有Tli RNase H，可抑制因c DNA中残存m RNA对实时荧光定量PCR造成的阻害作用。反应体系10.0μL:SYBR GreenⅠ荧光染料预混试剂5.0μL，上、下游引物（10μmol/L）各0.3μL，c DNA模板1.0μL，灭菌双蒸去离子水3.4μL。扩增程序：95℃预变性30 s；95℃5 s，60℃30 s，进行40个循环。根据目的基因和内参基因的阈值循环数（Ct），采用2-ΔΔCt法计算样品中各目的基因的相对表达量。