《表1 Lnc RNA-AC的引物序列》

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《长链非编码RNA(AC073934.6)慢病毒质粒构建及其对HEY和HeLa细胞系SND1表达的影响》

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收集1×106个卵巢癌细胞HEY，提取细胞基因组DNA。根据lnc RNA-AC以及真核表达质粒p LVX-IRES-Puro的基因序列，设计出针对lnc RNA-AC exon1和exon2的引物（F1+R1、F2+R2），并将化学合成的第3个外显子作为引物（F3+R3）（表1），引物由金唯智生物科技有限公司合成。利用同源重组的方法（图1），以基因组DNA为模板，F1+R1为引物，扩增出含第1个外显子的DNA片段（F1R1）；同时，通过巢式PCR获得第2个外显子，首先以F2+R3为引物，扩增出lnc RNA-AC中包括第2个和第3个外显子的DNA片段（F2R3），再以F2R3为模板，F2+R2为引物，扩增出含第2个外显子的DNA片段（F2R2）。然后将化学合成的第3个外显子的DNA片段（F3R3）单链经过退火变成双链。利用重叠延伸PCR，以上述3个DNA片段为模板，F1+R3为引物，获得目的基因（F1R3）。