《表2 Ⅱ型MIRUs特异常规引物Ⅱ＿MIRU-F对于痰液样本的恒温扩增》

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《基于常规引物靶向结核分枝杆菌Ⅱ型分枝杆菌散在重复单位的恒温扩增》

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恒温扩增方法针对靶标核酸的检测下限至关重要。以一个针对Mtb IS6110的恒温扩增方法（即PSR）为例，反应50 min的检测下限可低至0.92 pg/μL[12]。相比于引物Ⅱ＿MIRU-F/Ⅱ＿MIRU-R，引物Ⅱ＿MIRU-F能够更加特异地检测Mtb，而不能检测其他菌株（图4、图5）。恒温扩增2 h，Ⅱ＿MIRU-F可检出低至0.4 ng/μL的Mtb H37Rv基因组DNA；恒温扩增3 h，Ⅱ＿MIRU-F可检出低至40 pg/μL的Mtb H37Rv基因组DNA（图6）。因此Ⅱ＿MIRU-F对靶标核酸的检测下限明显偏高，且扩增时间较长。进一步发现，当用Ⅱ＿MIRU-F检测痰液样本时，和Xper Mtb/RIF结果相比，虽然Ⅱ＿MIRU-F可以检测出PTB患者，但是其亦在对照志愿者的痰液扩增出核酸产物（表2）。基于Ⅱ＿MIRU-F较高的检测下限（图6）、较长的扩增时间及其低特异性（表2），判断其不适合用于临床检测痰液样本。