《表3 四因素三水平正交试验》

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《cpDNA psbA-trnH在硬叶兜兰分子进化中的应用价值》

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注:扩增程序:预变性:94℃，5 min；变性:94℃，50 s；退火:根据引物选择合适的退火温度，50 s；延伸:72℃，50 s；34个循环；72℃下最后延伸7 min；4℃放置备用

采用正交设计对反应体系影响较大的4个因子（Mg Cl2浓度，引物浓度，DNA聚合酶量，d NTPs）进行较佳反应浓度组配研究，每个因子分设3个水平：Mg Cl2浓度（1.5，2.0，2.5 mmol/L），d NTPs浓度（0.3，0.4，0.5 mmol/L），引物浓度（0.3，0.4，0.5μmol/L），DNA聚合酶（0.5 U/10μL，0.6 U/10μL，0.7 U/10μL）。DNA模板浓度为60 ng/μL，按四因素三水平正交实验设计建立9组扩增体系（表3）。