《表7 墙体峰值荷载：2018年大庆市某规模化猪场PEDV检测及S1基因遗传变异分析》

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《2018年大庆市某规模化猪场PEDV检测及S1基因遗传变异分析》

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参照凝胶回收纯化试剂盒说明书，回收并纯化鉴定为阳性的PCR产物，将回收产物连接到p GM-T载体上，然后进行转化。步骤如下：（1）按照连接体系中的顺序将试剂加入到1.5 m L离心管中（连接体系见表7)；(2）轻弹离心管，混匀内容物，并短暂离心，放入16℃金属浴中连接16 h；(3）将50μL TOP10感受态细胞加入到连接产物中，轻轻混合，冰浴30 min；(4）将离心管置于42℃水浴90 s，取出离心管立即冰浴2～3 min；(5）向离心管中加入500μL预热的SOB培养基，置于37℃摇床，以150×g培养45 min；(6）将菌液在离心管中混合后，将100μL菌液接种到Amp+抗性的LB固体培养基，用无菌的玻璃涂布器涂开细胞，在培养箱中孵育12～16 h；(7）从每个平板上挑取单个菌落放入含有50μL SOB液体培养基的离心管中，将其作为模板进行菌落PCR（同1.2.4），并通过1.0%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。向摇菌管中加入5 m L Amp+抗性LB液体培养基，再加入鉴定为阳性的50μL菌液，170 rpm振荡培养10～14 h，于EP管中加入50μL甘油，再加入1 m L阳性菌液混合均匀，送由哈尔滨博仕生物技术有限公司测序。