《表2 BL21-p ET28a-Hc PR10诱导表达的正交分析表》

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《盐穗木病程相关蛋白HcPR10抗血清的制备及鉴定》

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将测序正确的重组质粒p ET28a-Hc PR10转化大肠杆菌BL21，按照张冀等（2018）的方法诱导表达目的蛋白，将诱前、诱后、诱后上清和诱后沉淀于4℃，12 000 r·min-1，离心2 min，各取20!L点样，用15%SDS-PAGE检测。以可溶性融合蛋白占总蛋白含量的百分比为依据，对诱导的IPTG浓度（0.4、0.7、1.0 mmol·L-1）、温度（27、31、37℃）、转速（180、200、220 r·min-1）和时间（4、5、6 h）进行4因素3水平正交试验（表1），设计正交分析表（表2），分析这4个因素对Hc PR10重组蛋白可溶性的影响，优化表达体系。对正交实验9组不同条件下诱导的蛋白进行SDS-PAGE电泳，并通过Image J对电泳条带进行灰度扫描，确定Hc PR10原核诱导表达的最佳条件。在最佳诱导条件下表达重组蛋白His-Hc PR10，收集菌体，超声破碎，8 000r·min-1，离心10 min收集上清，上镍柱纯化蛋白，然后用200 mmol·L-1的咪唑洗脱，SDS-PAGE检测洗脱蛋白，用索莱宝公司BCA蛋白定量试剂盒进行定量，分装置于-80℃冰箱保存。